早期人胚神经干细胞分布及分离培养

目的　研究发育早期人胚脑神经干细胞的形态特征及其分布情况 ,并观察其体外生长分化特性。方法　计划生育流产的 6～ 12周胚胎大脑组织切片用vimentin抗体进行免疫组织化学染色 ,光镜观察。机械分离皮质细胞 ,用无血清培养基和含血清培养基进行悬浮和贴壁培养 ,分别用MAP2 、GFAP及GalC抗体进行免疫细胞化学染色 ,鉴定干细胞和神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结果　发育早期大脑Vimentin阳性细胞分布广泛 ,细胞形态单一 ,多呈圆球形 ,体积较小。体外培养的大脑皮质细胞在培养的第 5～ 7天时 ,形成较多克隆 ,可多次传代 ;贴壁培养时细胞发生分化 ,分别为MAP2 、GFAP、GalC阳性的神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结论　胚胎发育早期大脑神经干细胞分布广泛 ,形态单一 ,皮质Vimentin阳性细胞数量多 ,便于分离 ,是最佳神经干细胞分离部位 ;人NSCs可以在体外增殖并发生多向分化     

围产期母体营养状态对子代下丘脑食欲调控网络胚胎编程的研究进展

围产期的不良营养因素对子代相关组织的发育具有程控作用,可能引起能量代谢异常并导致代谢相关性疾病的发病。下丘脑是各种食欲调节信号的主要整合中枢,目前已发现多种食欲调节肽在下丘脑食欲调节网络中都扮演了重要的角色。研究表明,下丘脑的食欲调节网络在出生前就已建立,孕晚期及断奶前是食欲调控神经系统的分化发育的关键时期。食欲的调控是一个复杂的生理过程,多种递质、调质或肽类物质参与介导这一机制。其中,脂肪细胞释放的瘦素(leptin)是调控食欲和能量代谢的重要因子。Leptin在围产期母体肥胖程控子代肥胖及代谢异常中可能同样扮演着重要角色,下丘脑食欲调控神经网络的正常发育也一定程度地依赖于出生早期leptin水平的迅速升高。下丘脑的多个脑区,包括摄食调控中枢神经元均表达瘦素受体。研究围产期营养状态对子代下丘脑leptin神经调控网络发育的胚胎编程作用对揭示代谢性疾病发病的先天因素具有重要意义。     

EBl基因表达与胚胎染色体数目异常的关系

目的研究EBl基因在胚胎绒毛细胞中的表达，并分析其对染色体分离的影响。方法采用荧光定量PCR技术检测EBl基因在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞和自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达差异；免疫组织化学方法检测EBl蛋白在两者中的表达情况，并用Western blot加以验证。结杲EBl基因mRNA拷贝数／GAPDH基因mRNA拷贝数的均值在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中为0．01004±0．008223，在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中为0．1509±0．0633。Western blot和免疫组织化学结果表明其在自然流产绒毛核型分析异常胚胎细胞中的表达也高于其在人工流产绒毛核型分析正常胚胎细胞中的表达。经统计分析，EBl基因mRNA水平和蛋白水平在上述两组细胞中的表达均有显著差异。结论EBl基因在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达明显高于其在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中的表达，其高表达可能导致染色体分离异常。     

小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性.方法 原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同,分为MEF条件培养基组、DMEM组,应用MTT法...     

有机磷农药混剂对大鼠的胚胎毒性和致畸性研究

目的观察敌敌畏、乐果和马拉硫磷对大鼠的致畸作用。方法将SD孕鼠随机分为4组,即有机磷农药混剂20.4、30.64、0.8 mg/kg 3个剂量染毒组和阴性对照组。分别经口给予不同剂量的有机磷农药混剂和生理盐水,进行传统的致畸实验,观察母鼠及胎仔的情况。结果有机磷农药混剂对母鼠体质量有影响,40.8 mg/kg组体质量明显减轻。孕鼠的生殖能力包括平均黄体数、胎盘重和窝重与阴性对照组比较也有显著性差异(P<0.05)。染毒组胎仔体质量与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。40.8 mg/kg和30.6 mg/kg组还出现死胎、吸收胎和畸胎,但与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论在实验剂量范围内,有机磷农药混剂对大鼠有母体和胚胎毒性。     

小鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养及鉴定

目的建立分离培养及鉴定小鼠肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs)的方法,为临床应用奠定基础。方法分离胚鼠肠管,消化后接种于添加N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁培养;连续传代后用血清促进GNCSCs分化;最后用免疫细胞化学方法染色鉴定。结果分离培养的细胞聚集生长,形成的克隆球可以传代;克隆球p75染色阳性;分化后的细胞分别表达肠神经元、神经胶质细胞和平滑肌细胞特异性抗原。结论分离培养的克隆球具有自我更新和多向分化的能力,表达肠神经嵴干细胞的特异性抗原p75,是肠神经嵴干细胞。     

小鼠胚胎吸管的改进

改进的口吸式小鼠胚胎吸管由外径 1.5mm的硬质玻璃细管和一次性输液器改成的塑料软导管及过滤器组成 ,适用于各种实验动物胚胎操作。该吸管制作方便 ,安全实用 ,无毒无污染 ,价格低廉。     

胚胎干细胞研究能否得到伦理辩护

胚胎干细胞研究是当前生命伦理学争论最激烈、最突出的一个领域,主要围绕两个问题而展开：（1）如何看待胚胎,胚胎干细胞研究是否毁灭生命;（2）治疗性克隆是否必然滑向生殖性克隆。本文认为,不能简单地把胚胎干细胞研究等同于毁灭生命;治疗性克隆并不必然滑向生殖性克隆。胚胎干细胞研究是一项值得支持的人道主义事业,应能得到伦理辩护。但必须严格伦理规范和伦理程序,这是支持胚胎干细胞研究的一个极为必要且十分重要的条件。     

不同移植方案在不同获卵数患者中的临床结局分析

目的比较不同获卵数患者2枚第3天(D3)胚胎移植和单囊胚移植的临床结局,为临床移植策略的选择提供数据支持。方法回顾性分析2014年1月至2014年12月在郑州大学第三附属医院生殖医学科行体外受精/卵胞浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)治疗的患者,根据获卵个数分为3组,A组获卵个数为5~9枚卵子,B组为10~14枚卵子,C组为≥15枚卵子。每组患者均有4种不同的移植方式,移植2枚D3胚胎(a)、移植1枚囊胚(b)、复苏移植2枚冷冻D3胚胎(c)和复苏移植1枚冷冻囊胚(d);比较3组患者卵子的2PN受精率、可移植胚胎率及优质胚胎率;比较各组患者4种移植方式的胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率、多胎率和流产率等差异。结果 1A组、B组和C组分别有667、573、479个移植周期,其中A组患者IVF的2PN受精率和可移植胚胎率明显高于B组和C组(P=0.003/P<0.001);2A组患者4种移植方式的生化妊娠率、临床妊娠率和流产率差异均无统计学意义(P>0.05),但c的种植率明显低于a和d(P=0.027/0.020);B组患者中d的种植率明显高于a和c(P=0.005/0.001);C组患者中d的生化妊娠率和临床妊娠率均明显高于a(P=0.048/0.027)和c(P=0.003/0.001),且囊胚移植的种植率均明显高于D3胚胎(P<0.05);33组患者单囊胚移植多胎率较胚胎移植明显降低(P<0.05)。结论对卵巢高反应人群(获卵数≥15枚),单囊胚移植在保证高种植率和妊娠率的同时,明显降低了多胎率;而获卵数为5~9枚和10~14枚的患者,D3胚胎移植的临床妊娠率和单囊胚移植相似,但多胎率明显增高;D3胚胎培养囊胚后择期移植具有较高的临床妊娠率,对于获卵数≥10枚患者是最佳的移植方案。     

铁皮石斛早期体细胞胚胎发育及原球茎形态发生研究

铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall ex Lindl）是兰科石斛属多年生草本植物,是一种濒危物种,我们以此为材料建立了高效体细胞胚胎（以下简称“体胚”）发生体系,并从含体胚的胚性愈伤组织中分离出一些胚胎发生的特异基因。本项目就是在此基础上,欲建立早期体胚分离纯化技术,