靶向RWDD3基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建RWD结构小泛素化增强子(RWDD3)shRNA慢病毒表达载体,为探讨RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤细胞RWDD3基因的相关研究奠定基础。方法设计RWDD3的3条siRNA的靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA发卡结构shRNA,分别与双酶切后的载体连接,构建3种重组质粒pGC-LV-shRNA1、pGC-LV-shRNA2和pGC-LV-shRNA3,并转化于DH5α感受态细胞,提取阳性克隆质粒测序,转染293T细胞,生产慢病毒颗粒,并检测病毒滴度。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别感染人脑胶质瘤细胞U251,实时定量PCR和Western blot分别检测RWDD3mRNA和蛋白的沉默效果。结果测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功,滴度分别为5×10~(11) TU/L、4×10~(11) TU/L、5×10~(11) TU/L。感染U251后,RWDD3mRNA及蛋白的表达量均较阴性对照组和未感染组明显降低(P<0.05);其中以LV-RWDD3-shRNA-1作用显著,mRNA表达下调79.2%,蛋白表达下调68.2%(P<0.05);而阴性感染对照组和未感染组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建3种RWDD3shRNA慢病毒表达,可有效下调U251细胞RWDD3mRNA和蛋白的表达,其为进一步研究以RWDD3为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供稳定转染细胞的载体奠定基础。     

生理性衰老过程中大鼠胃肠运动功能与脑-肠轴结构型一氧化氮合酶含量的变化及意义

目的探讨大鼠在生理性衰老过程中胃肠运动功能脑-肠轴结构型一氧化氮合酶含量的变化及其意义。方法将健康SD大鼠按3月龄、9月龄、18月龄和24月龄分为4组,每组各6只。采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测大鼠脑-肠轴组织(全脑及胃体、空肠、回肠、结肠、乙状结肠与直肠交界处组织)中的神经型一氧化氮合酶及内皮型一氧化氮合酶含量,并比较其在不同年龄组的变化规律。结果各年龄组大鼠脑-肠轴神经型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶含量随年龄增长而降低,这种变化在成年后(9月龄、18月龄及24月龄)大鼠更为显著(P<0.05,P<0.01)。神经型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶在大鼠脑-肠轴各部位的含量有一定差异,且其分布差异随着大鼠年龄增长无显著性改变。结论在大鼠生理性衰老过程中,脑、胃体、空肠、回肠、结肠、乙状结肠与直肠交界处神经型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶的表达随年龄增长而显著下降,推测老年人功能性胃肠疾病的发病机制可能与此有关。     

信息之窗

运电信号函[2013]512号中国铁路总公司关于印发《60kg／m复交心轨外锁安装方案改进技术审查意见》的通知 2013年10月，运输局组织专家召开60kg/m复交心轨外锁安装方案改进技术审查会，并通过了上道前的技术审查。     

我国汽车用电线束现状及发展趋势

汽车线束具有汽车神经之称,是对汽车进行电信号控制的载体。汽车线束是汽车电路的网络主题,没有线束也就不存在汽车电路。目前,汽车线束编成的形式由电线、接插件和传感器以及其他器件组成。汽车线束要能保证汽车在各种恶劣环境和行驶条件下的更高的安全可靠性,着就为汽车线束的技术发展提出了更高的要求。     

高压氧对正常大鼠血中一氧化氮及磷酸肌酸激酶含量的影响

目的 探讨０．２ＭＰａ高压氧（ＨＢＯ）对正常组织一氧化氮（ＮＯ）系统和血清磷酸肌酸激酶含量的影响。方法 实验用Ｗｉｓｔａｒ大鼠３６只，随机分成对照组和ＨＢＯ处理后第１、５、１０、２０、３０天组。分别于０．２ＭＰａ ＨＢＯ处理后第１、５、２１０、２０、３０天用流式细胞仪测定大鼠海马神经 环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量及用琼脂糖凝胶电泳法测定血清磷酸肌酸激酶脑型同功酶（ＣＫ－ＢＢ）浓度的变化。结果 ＨＢＯ     

“第六届中国汽车营销首脑风暴”黄山峰会盛大召开

由中国市场学会、搜狐汽车、中央电视台广经中心主办的“第六届中国汽车营销首脑风暴”于8月8日在黄山盛大举办，40多位汽车企业营销总经理参与了这次峰会，几乎囊括了中国所有的汽车企业。     

脑益嗪抗运动病时大鼠脑细胞钙离子超微结构定位的变化（论著）

目的；观察脑益嗪抗运动病时脑细胞钙离子（Ｃａ＾２＋）的变化并探讨其作用机理，方法：采用Ｃａ＾２＋超微结构定位方法，对ＳＤ大鼠预先给予脑益嗪后，采用正负交变速度旋转刺激制备运动病模型，观察运动病人大鼠和脑益嗪给药组大鼠大脑皮质，小脑皮质和脑干前庭区脑细胞Ｃａ＾２＋超微结构定位变化。结果：运动病大鼠大脑皮质，小脑皮质和脑干前庭区脑细胞质基质，线闰体和内质网中Ｃａ＾２＋反应产物增多，预先给予脑益嗪后，大     

高压氧对大鼠心脑肺超微结构的影响

目的 探讨高压氧（ＨＢＯ）对心、脑、肺超微结构的影响。方法 １６只大鼠随机分为ＨＢＯ组及对照组，将ＨＢＯ组鼠一次暴露于纯氧舱内，于０．２５ＭＰａ（２．５ＡＴＡ）压力下停留２小时，总暴露时间为３小时，对照组鼠则暴露于常压空气中３小时。然后分别观察两组动物心、脑、肺超微结构的变化。结果 ＨＢＯ组动物心肌细胞线粒体肿胀、细胞核固缩、核周膜性空泡；大脑皮质神经元细胞核固缩和核周间隔增宽；肺上皮细胞内质网扩     

脑眼手脚协调，路灯机车和谐

我在公交行业开车近20年,近几年一直在琢磨如何把车子开得更好,怎样使油耗更省。     

补肾健脑方对血管性痴呆大鼠皮质和海马脑血流量及乙酰胆碱含量的影响

目的研究补肾健脑方对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆、局部脑血流量、乙酰胆碱(ACh)含量及CA1区神经元形态学改变的影响,探讨其治疗VD的可能机制。方法双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)制备大鼠慢性脑缺血致VD动物模型,造模完成后,随机分为6组。分别用蒸馏水、多奈哌齐混悬液以及不同浓度补肾健脑方灌胃,30 d后水迷宫实验测定大鼠学习记忆能力,放射性测量脑血流量,比色法测定ACh含量,HE染色观察神经元形态学改变。结果与模型组相比,补肾健脑方能提高VD大鼠的学习记忆能力,改善皮质和海马脑血流量,提高ACh含量,与多奈哌齐组相比未见统计学差异。结论补肾健脑方改善VD大鼠的学习记忆能力的作用机制可能是通过增加皮质和海马的脑血流量,增加皮质和海马ACh含量而发挥作用的。