大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养方法,检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率。方法应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs,贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达,然后用pEGFP-N3与Lipofectamine 2000不同浓度比例转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率。结果①原代MSCs多呈纺锤形或梭形,有聚集生长的倾向,多3~5个细胞成为一个集落。传代后,细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样,长梭形,胞浆突起较少,胞体轮廓不甚清晰,胞体也相对较大;②GFP转染后24 h即可见绿色荧光蛋白表达,72 h表达最强,此后逐渐减弱,到4周时仍可见少量表达;③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关,1∶2到1∶3最高。结论利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;GFP转染是一种较好的MSCs标记方法。     

单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系

目的探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(C-C快速法)检测沙眼衣原体(CT),培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿道分泌物HSV2。结果NGU患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。NGU患者组和健康对照组的HSV2IgGI、gM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%,两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%,与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论HSV2是NGU的重要病原体之一。FQ-PCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。     

GFP重组腺相关病毒报告病毒的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组腺相关病毒载体和报告病毒,并观察其在真核细胞的表达。方法采用DNA重组技术将GFP基因片段亚克隆到pss HGCMV载体的EcoRⅠ和BamHⅠ位点,构建表达GFP重组腺相关病毒载体pss HGCMV-GFP。以此载体转染143细胞进行GFP重组腺相关病毒包装,产生重组报告病毒颗粒并作纯化。用地高辛标记的CMV polyA片段作为探针,采用斑点杂交方法检测重组病毒的物理滴度。采用氯化钙法体外转染培养的NI H3T3细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察其在细胞中的表达。结果成功构建了GFP重组腺相关病毒载体和报告病毒—VssCMV-GFP,所获病毒的滴度为3.16×1012病毒颗粒/mL。重组腺相关病毒VssCMV-GFP感染NI H3T3细胞后48h开始出现绿色荧光,并逐渐增强,至120h荧光更加集中且很强。结论VssCMV-GFP对真核细胞具有感染能力,并且GFP可以在活细胞内有效表达,提示该重组腺相关病毒可应用于介导基因转移真核细胞进行基因治疗。     

抗坏血酸体系羟自由基的产生与测定

用苯甲酸羟基化产物的荧光检测了Ｆｅｎｔｏｎ反应产生的羟自由基，结果表明，在适当条件下，抗坏血酸可显著促进羟自由基的生成，抗坏血酸亦是一种有效的羟自由基清除剂。用高效液相色谱首次从Ｆｅｎｔｏｎ类型反应体系中分离出高荧光的２－羟基苯甲酸，定量测定了３种主要羟基化产物，从而能够初步计算反应体系中羟自由基的数量。     

不同pH值的40mL/L磷酸盐缓冲甲醛液固定乳腺癌组织对FISH法检测HER2基因结果的影响

目的探讨不同pH值的40mL/L磷酸盐缓冲甲醛固定液对荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测乳腺原发性浸润癌人类表皮生长因子受体2(human pidermal growth factor receptor 2,HER2)基因扩增结果的影响。方法选取中山市博爱医院2014年3月至2017年1月期间,手术切除的乳腺癌75例,同一肿瘤病变部位取材4块,按照固定液pH不同,随机分为A、B、C、D组。固定液使用40mL/L磷酸盐缓冲甲醛,A~D组固定液pH值分别为6.0、7.0、7.5、8.0,分别固定15h后制作石蜡切片。采用FISH法检测HER2基因扩增情况,比较各组HER2基因扩增检测结果的差异。结果 (1)在荧光显微镜下,A、D组的组织轮廓较模糊、出现细胞碎片、部分探针定位欠佳、出现信号不规则甚至丢失、核溶解现象,见明亮的桔红/绿荧光信号。B、C组的组织轮廓清晰而完整、背景洁净、探针定位准确,见耀眼的桔红/绿荧光信号。(2)B、C组HER2基因扩增阳性率稳定在24.00%~25.33%;B、C组的基因扩增阳性率显著高于A、D组(P<0.05)。结论采用荧光原位杂交法检测乳腺原发性浸润癌HER2基因扩增,固定液的pH值在7.0~7.5之间可获得可靠的检测结果。     

三甘醇苯并香豆素甲酸酯的合成及其荧光特性

合成了三甘醇苯并[5,6]香豆素-3-甲酸酯(Ⅳ)并经1HNMR、13CNMR、FTIR、MS及元素分析确证.化合物Ⅳ和三甘醇二苯并[5,6]香豆素-3-甲酸酯(V)发出蓝色荧光,它们的最大发射波长λem受溶剂极性影响较小.甲醇和乙醇能使V的荧光强度增强,二甲亚砜是该类物质的荧光猝灭试剂.在乙腈中,Ca2+能使化合物Ⅳ荧光强度降低30％,而使化合物V荧光强度增大40％.     

国外沥青混凝土路面新型研究方法分析

介绍国外沥青混凝土路面新型研究方法,并着重介绍了运用这些研究方法取得的最新研究成果。这些研究方法和成果,可为国内沥青混凝土路面科研、设计和施工提供借鉴。     

《道路交通反光膜》（GB/T 18833-2012）对交通安全的促进意义分析

交通标志是一种非常重要的交通安全设施.2013年实施的GB/T 18833《道路交通反光膜》相对于2002版本,极大地提升了道路交通反光膜的技术要求.通过新旧标准的对比,介绍了新国标对交通安全的促进意义.     

人B72／hTERT融合基因转染胃癌细胞与体外免疫效应研究

目的：研究人B72／hTEliT融合基因转染胃癌细胞激发的抗肿瘤免疫效应。方法：将构建的真核荧光表达载体pEGFP—C3-B72-hTERT，通过脂质体转染技术转染人胃癌细胞株GC823。把外周血来源的树突状细胞（DC）负载肿瘤抗原后，与自体T淋巴细胞共培养3d，获得细胞毒性T淋巴细胞（CPL）。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测CTL对转染和未转染pEGFP—C3-B72-hTERT质粒的人胃癌细胞GC823的杀伤活性。结果：C11L对转染pEGFP—C3-B72-hTERT的肿瘤细胞的杀伤活性大于未转染细胞的杀伤活性（P〈0．05）。结论：人B72／hTERT融合基因转染肿瘤细胞后，可诱导出明显的抗GC823细胞的免疫效应。     

荧光磁粉探伤法应用探讨

荧光磁粉探伤法具有对比率高、灵敏度、适合暗处及作业空间狭窄部位的探伤作业，因此值得推广应用。