脑益嗪抗运动病时大鼠脑中c—fos基因表达水平的变化

目的：探讨脑益嗪抗运动病作用的神经中枢机理与脑细胞ｃ－ｏｆｓ基因表达的关系。方法；采用正负交变加速度旋转刺激ＳＤ大鼠制备运动病模型，为运动病组；在脑益嗪组，ＳＤ大鼠预先注射脑益嗪，１小时后如运动病组进行旋转刺激；正常ＳＤ大鼠作为对照组。用ｃ－ｆｏｓ基因探针对３组大鼠的大脑皮质，小脑皮质及脑干前庭区进行原位杂交。用免疫组化方法检测３组大鼠脑组织中Ｆｏｓ蛋白的含量。观察运动病组大鼠和佃嗪组大鼠大脑皮质     

miR-185*对癫痫海马神经元中BDNF-TrkB通路表达的影响

目的研究海马神经元癫痫模型中的BDNF/TrkB信号通路及miR-185*对其的调控。方法构建miR-185*表达载体。体外培养海马神经元,7d后将其随机分为正常组、癫痫组、正常+BDNF组、癫痫+BDNF组、正常转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*+BDNF组。免疫荧光、膜片钳及免疫印迹技术观察转染miR-185*后BDNF/TrkB通路的表达变化。结果癫痫+BDNF组海马神经元细胞的TrkB蛋白磷酸化水平较正常+BDNF组降低,有统计学意义(P<0.05);正常+BDNF组TrkB蛋白的磷酸化水平比正常组的磷酸化水平升高,有统计学意义(P<0.001);癫痫+BDNF组TrkB蛋白磷酸化水平比癫痫组升高,有统计学意义(P<0.05);而癫痫+miR-185*+BDNF组的TrkB蛋白磷酸化水平较癫痫+BDNF组和癫痫转染miR-185*组升高(P<0.001)。结论BDNF可以激活BDNF/TrkB信号通路,转染miR-185*后可以消除对癫痫状态下BDNF/TrkB信号传导通路的抑制。     

大鼠弥漫性轴索损伤后高迁移率族蛋白1的动态表达及其对神经细胞凋亡的影响

目的研究高迁移率族蛋白1(HMGB-1)在弥漫性轴索损伤(DAI)后脑组织内的动态表达及其对神经细胞凋亡的影响,探讨其参与DAI后脑组织炎症反应的机制。方法采用大鼠头颅瞬间旋转装置制备大鼠DAI模型,通过组织病理学方法评价DAI模型的稳定性,采用免疫组化、Western blot、RT-PCR等方法分别于造模后6h,1、3、7d为时间点,测定DAI后HMGB-1的表达及分布变化,并采用TUNEL试剂盒进一步观察DAI后神经元的凋亡。结果免疫组化结果显示,在DAI后6h及1d,大鼠皮层脑组织中HMGB-1阳性细胞数呈下降趋势,但是3d后开始明显增多;Western blot结果证实,DAI后早期(6h、1d),皮层脑组织中HMGB-1蛋白水平较对照组显著降低,然而在DAI后3d出现明显升高,一直持续至第7天;RT-PCR显示,DAI后早期(6h)HMGB-1mRNA水平并无明显增加,DAI后1d仅有轻度增加,DAI后3dHMGB-1mRNA水平才开始明显升高。TUNEL结果显示,在DAI后6h神经元凋亡已明显增加,并呈持续增加趋势,DAI后3d达到高峰,一直持续至DAI后7d仍处于较高水平。结论大鼠DAI后脑组织内HMGB-1表达呈逐渐升高的动态变化,其脑组织总蛋白水平早期(6h、1d)降低,可能由坏死神经元释放及基因转录水平较低所致,而晚期(3、7d)明显升高,可能是胶质细胞活化诱导基因表达升高所致,HMGB-1与神经元凋亡并无直接相关性,其可能通过诱导炎症反应间接参与DAI后的神经元凋亡。     

G蛋白偶联的内整流型钾通道在哮喘模型大鼠肺组织的表达

目的检测G蛋白偶联的内整流钾通道(G protein-coupled inwardly rectifying potassium channels,GIRK)在哮喘模型中的表达改变,并寻找调节其表达变化的因素。方法用卵清蛋白和铝佐剂致敏E3大鼠14d后,用卵清蛋白进行攻击以诱导哮喘模型,用磷酸盐缓冲液致敏并攻击的大鼠作为对照,通过观察肺组织病变、总IgE水平的改变等手段评价哮喘模型。用RT-PCR检测GIRK亚基1~4的mRNA水平,用Western blot等手段检测大鼠肺组织中GIRK1和GIRK3的蛋白水平,并用免疫组化确定肺组织中GIRK表达的解剖部位。根据免疫组化的结果,选用A549细胞株作为模型,用IL-4刺激,用PCR、Western blot等手段检测IL-4对GIRK表达的影响。结果与对照组相比,哮喘模型组肺组织中GIRK的mRNA水平下降,哮喘模型组肺组织中GIRK蛋白水平也下降。免疫组化结果显示,GIRK在大鼠主要表达于气道上皮。随IL-4浓度的升高,在A549细胞中GIRK的所有的亚基的表达均呈剂量依赖性下降趋势;选择50ng/mL IL-4刺激A549细胞,GIRK的所有的亚基的表达均呈刺激时间依赖性的下降。结论在E3大鼠哮喘模型中,IL-4下调气道上皮中GIRK的表达。     

夏季宜进行耐热锻炼

我国大部分地区从5月开始就进入夏季,在盛夏酷暑的日子里,高温环境对人体是个严峻的考验。同样面对热浪,为什么有些人受到的影响较小呢?究其原因,主要是人的热耐受能力的不同所致。     

重组牛精核糖核酸水解酶基因的克隆、表达及纯化

牛精细胞核糖水解酶(BS-RNaseA)是一种在精细胞中大量表达并且对肿瘤细胞有毒性的蛋白,可以用来抗肿瘤。为降低成本,提高安全性因此计划通过基因工程的手段,在原核生物中克隆、表达BS-RNaseA基因并进一步的纯化目的蛋白。利用PCR技术扩增得到牛RNA水解酶基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-CS,进行酶切和测序验证,然后利用IPTG诱导表达该重组子,并纯化目的蛋白。SDS-PAGE图谱显示在42kd处有明显的诱导,表明牛RNA水解酶基因获得高效表达。用GST试剂盒纯化目的蛋白然后再用SDS-PAGE检测,结果显示目的蛋白得到了有效的纯化。综上结果说明牛精细胞RNA水解酶的成功克隆、表达并纯化,为今后进一步研究其生物学活性及抗肿瘤打下基础。     

RNA干扰的明确通路

在研制有效药物的过程中，降低或去除细胞中某一种蛋白的量是一条治疗疾病的新途径。为了达到这个目的，阻滞信使RNA（mRNA）的活动就非常必要，信使RNA是基因的单一条链RNA拷贝。它将基因中蛋白构建的信息传递到细胞浆内的蛋白合成装置上去。     

SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达

目的构建SIK2cDNA及其截短体的原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计SIK2及其截短体引物,采用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-Δ1(280⁹26)、SIK2-Δ2(400926)、SIK2-Δ2(400⁹26)、SIK2-Δ3(1926)、SIK2-Δ3(1⁴00)、SIK2-Δ4(700400)、SIK2-Δ4(700⁹26)五个cDNA片段,并将扩增的cDNA片段插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建GST标签的重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导SIK2、SIK2-Δ1、SIK2-Δ2、SIK2-Δ3和SIK2-Δ4五个截短体的原核表达,用考马斯亮蓝染色和Western blot进行鉴定。结果成功构建了SIK2全长及其截短体cDNA的重组质粒,用考马斯亮蓝染色及Western blot鉴定显示,SIK2全长及其截短体重组质粒均在大肠杆菌中诱导表达。结论在大肠杆菌中成功地诱导表达了SIK2重组蛋白及其截短体,为进一步研究SIK2各结构域的功能提供了实验基础。     

c-FLIP蛋白与卵巢癌细胞对TRAIL耐药抵抗的关系

目的探索卵巢癌细胞对TRAIL诱导凋亡耐药抵抗的机制。方法分别选择12.5、25、50、100ng/mL的人重组TRAIL蛋白作用于卵巢癌细胞3AO和CAOV3,在18、24、48、72h时间点收集细胞,MTT法检测细胞的生长抑制率;原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞;流式细胞仪(FCM)检测细胞的凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白c-FLIP蛋白表达的水平。结果 TRAIL抑制了3AO和CAOV3细胞的生长增殖,24h3AO、CAOV3细胞的生长抑制率分别为28%、10%,并且TRAIL增多可诱导细胞凋亡,24h的3AO细胞凋亡率(8.5%)明显高于CAOV3(5.5%)。CAOV3细胞中c-FLIP蛋白的表达水平高于3AO细胞。结论 c-FLIP蛋白是卵巢癌细胞对TRAIL耐药抵抗的一种重要调控蛋白。     

Ac-SDKP对炎性因子MRP-14(S100A9)的调节在硅肺大鼠纤维化病变中的作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过抑制炎性因子髓系相关蛋白14(myeloid-related protein14, MRP-14)以及胶原蛋白的表达,从而阻抑硅肺大鼠纤维化病变中硅结节的形成和胶原蛋白的沉积。方法采用一次性支气管灌注二氧化硅(SiO_2)粉尘的方法制备大鼠硅肺动物模型,60只SPF级健康成年大鼠随机分为对照4周组、对照8周组、硅肺模型4周组、硅肺模型8周组、Ac-SDKP预防治疗组和Ac-SDKP抗纤维化治疗组,每组10只。免疫组织化学技术检测MRP-14蛋白在硅肺模型组织内的定位表达;Western blot法检测MRP-14以及胶原蛋白在硅肺模型组织内的表达。结果与相应的对照组相比,硅肺模型组大鼠硅肺纤维化区域MRP-14和胶原蛋白的表达增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。与硅肺模型8周组相比,给予Ac-SDKP干预后MRP-14和胶原蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Ac-SDKP可通过抑制炎性因子MRP-14的表达而发挥其抗硅肺纤维化的作用。