人B7.2/hTERT融合基因真核绿色荧光载体的构建

目的:构建人共刺激分子(B7.2)和端粒酶邀转录酶(hTERT)融合基因真核绿色荧光表达载体。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别从乳腺组织、乳腺癌组织中扩增出B7.2和hTERT cDNA基因片段,经回收、纯化后,分别克隆入质粒pGEM-T,然后双酶切下两目的片段,回收后再克隆入真核表达质粒,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达。结果:通过PCR鉴定和序列分析证实插入片段序列正确。结论:应用分子生物学技术成功构建人B7.2/hTERT真核绿色荧光表达载体,为肿瘤的免疫治疗研究提供了物质基础。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白的表达

目的研究核因子κB(NF-κB)信号通路阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)表达的影响。方法培养肝细胞L-02并将其分为3个组,即胆固醇作用组、PDTC 胆固醇作用组和对照组,分别作用细胞48 h。采用Western blot和免疫比浊法分别检测细胞内和细胞培养液中CRP含量,比较有无PDTC作用下CRP表达量的变化。结果胆固醇能显著诱导人肝细胞C反应蛋白的表达(P<0.05),且其诱导效应随浓度增加而增强;加入PDTC阻断NF-κB信号通路后,胆固醇诱导人肝细胞CRP基因表达的作用减弱(P<0.05)。结论PDTC阻断NF-κB信号通路后,CRP表达量下降,提示NF-κB信号通路可能参与了胆固醇诱导CRP基因表达的过程。     

增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立

目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性。结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光。加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP。激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm。结论Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础。     

炎热烦躁 司机少吃肉为妙

为什么吃肉多就会让人的情绪脾气变得更加烦躁？这是因为肉类中含有大量动物蛋白，会使脑中的色氨酸含量减少，而导致人有侵略、忧虑和好斗的倾向。其次，肉中含钙的比率不高．多吃会造成体内钙浓度太低．也会增加人易怒及暴躁的倾向。最后，肉类中含有大量的饱和脂肪，过多摄入可使血管硬化，进而升高血压。血压增高是造成人情绪不稳定的一个重要原因。     

Ac-SDKP调控Gαs/Gαi信号抑制大鼠矽肺纤维化的作用

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过调控激动型G蛋白α(Gαs)/抑制型G蛋白α(Gαi)信号对大鼠矽肺纤维化发挥保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10):对照16周组,矽肺模型16周组,Ac-SDKP预防治疗组。采用HE染色观察肺组织病理形态的改变,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、Gαs、Gαi2、Gαi3和环磷酸腺苷(cAMP)的含量,采用免疫荧光染色检测矽肺组织α-SMA/Gαi3的共表达。结果在矽肺模型16周组,HE染色显示肺组织内出现多个细胞性结节的融合和间质纤维化的形成,并可见细胞纤维性结节的形成。免疫荧光化学染色显示在纤维化病变区域α-SMA/Gαi3共表达增强。与对照组比较,矽肺模型16周组α-SMA、CollagenⅠ、Fn、Gαi2及Gαi3的蛋白表达明显升高,Gαs和cAMP的表达明显下降;与矽肺模型16周组相比,Ac-SDKP预防治疗组肺组织病理损伤减轻,α-SMA/Gαi3共表达减少,α-SMA、CollagenⅠ、Fn、Gαi2及Gαi3的蛋白表达显著降低,Gαs和cAMP的表达明显升高。结论 Ac-SDKP能够通过调节Gαs、Gαi促进cAMP的生成对矽肺大鼠肺纤维化产生保护作用。     

体外冲击波碎石对茚地那韦相关泌尿结石患者PCT、肾功能及炎性指标水平的影响

目的 探讨体外冲击波碎石术(ESWL)对茚地那韦药物性泌尿系结石患者降钙素原(PCT)、肾功能及炎性指标水平的影响,为临床实践提供参考依据。方法 选取本院泌尿外科2017年1月—2021年1月收治的泌尿结石患者77例进行回顾性分析,按年限将其分成对照组(38例,非茚地那韦所致泌尿系结石患者)和观察组(39例,茚地那韦相关泌尿系结石患者)。治疗前、治疗后7 d,比较两组血清PCT、C反应蛋白(CRP)、血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、尿肾损伤分子-1(Kim1)水平,疼痛视觉横拟评分(VAS)及IgG、IgM、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果 两组治疗后7天时的血清PCT、CRP表达较治疗前均明显降低,且观察组改善程度高于对照组(P<0.05)。对照组患者治疗后肾功能指标尿Kim-1、Scr及BUA明显优于观察组(P<0.05)。观察组治疗前后VAS评分与对照组无统计学差异(P>0.05),但术中出血量及麻醉诱导后20 min平均动脉压(MAP)明显优于对照组。观察组患者治疗后7 d硒半胱氨酸(GSH-Px)、SOD明显优于对照组和本组治疗前(P&l...     

NLRP1及NLRP3在溃疡性结肠炎患者结肠组织中的表达及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者结肠黏膜组织中NLRP1及NLRP3的表达,并分析其与UC病情严重程度、内镜下病变严重程度及实验室指标的相关性.方法 收集46例UC患者(轻度22例,中重度24例)和20例正常对照者的结肠镜活检标本,采用免疫组化法及荧光定量PCR法检测结肠黏膜组织...     

益气养血保元方对肺癌细胞PCNA、p53蛋白表达的影响

采用免疫组化法观察益气养血保元胶囊 (OQP)对体外培养人肺癌 A- 549细胞 PCNA、p53蛋白异常表达的影响。结果 :OQP作用后 A- 549细胞 PCNA、p53蛋白表达减弱。提示 :OQP可抑制 PC-NA、p53蛋白表达 ,其抑癌作用机理可能与抑制 PCNA、p53蛋白表达有关。     

EHF肾组织肾小球超微结构和细胞表型的研究

研究流行性出血热 ( EHF)肾组织中肾小球超微结构和细胞表型的改变及其意义。方法　应用多重 PAP法研究 30例 EHF肾组织中肾小球α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)、结蛋白 ( desmin)和增殖细胞核抗原 ( PCNA)的表达及意义 ;应用电子显微镜观察肾小球的超微结构。结果　 EHF肾脏仅 4例肾小球显示痕量的 α- SMA阳性表达 ,无 desmin和 PCNA的表达。电镜下观察肾小球毛细血管内皮细胞不同程度肿胀。部分少尿期病例的个别肾小球见毛细血管内皮细胞坏死 ,管腔内有嗜中性粒细胞及血小板 ,内皮细胞与基底膜间充以低电子密度的物质。结论　 EHF肾组织中肾小球主要表现毛细血管内皮细胞超微结构的改变 ,而系膜细胞和上皮细胞仅表现不同程度的增生 ,肾小球无明显细胞表型的转化。作为全身毛细血管的一部分 ,肾小球毛细血管内皮细胞的损伤 ,可能在 EHF急性肾衰发病机理的研究中具有重要的意义     

两种酶结合物对棘球蚴三种抗原特异性及敏感性的检测比较

对９４例包虫病患者、４４例非包虫病患者及５０例健康人血清,用羊源林球蚴囊液、原头蚴及生发层抗原,分别进行了酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫及酶标记单抗人ＩｇＧ点免疫试验,其结果显示：前者对三种抗原的敏感性分别为９４．７％、９５．７％和９６．８％;后者分别为９２．６％、９３．６％和９３．６％。前者的特异性分别为８１．９％、９２．６％和９２．６％;后者分别为８７．２％、９１．５％和９１．５％。酶联金葡菌Ａ蛋白点免疫除了林球蚴囊液抗原的特异性低于酶标羊抗人ＩｇＧ点免疫外,原头蚴抗原、生发展抗原的特异性和三种抗原的敏感性均比后者高。