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以真核瞬时表达质粒ｐＳＶＬ为载体构建ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ真核表达质粒，用电穿孔法导入Ｃｏｓ－７细胞，以ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ１为靶细胞，检测其生物学活性；将不同剂量的ＰＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ质粒直接注射Ｂａ１ｂ／Ｃ小鼠股四头肌，动态观察小鼠血清中ＧＭ－ＣＳＦ的表达；将ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ质粒导入Ｋ５６２细胞，观察ＧＭ－ＣＳＦ对瘤细胞生长状态的影响。结果表明：构建的ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ真核表达质粒可在Ｃｏｓ－７细胞中有效表达ＧＭ－ＣＳＦ；小鼠骨骼肌直接注射ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ（１００μｇ／及２００μｇ），在血清中可检出ＧＭ－ＣＳＦ，在１０～１５ｄ达高峰（８Ｕ／ｍｌ），为临床应用提供了实验基础；导入ＧＭ－ＣＳＦ基因的Ｋ５６２细胞可表达ＧＭ－ＣＳＦ，且经ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的Ｋ５６２细胞增殖状态明显优于对照组，提示对造血细胞肿瘤单用ＧＭ－ＣＳＦ应慎重，而与其它细胞因子联合应用可能是一个合理的方案。 相似文献
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目的 构建人转化生长因子-β1(TGFβ1)基因RNAi质粒载体.方法 根据人TGFβ1 mRNA序列选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pRNA-U6.2/Lenti质粒并分别命名为pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2、pRNA-U6.2/Lenti-3、pRNA-U6.2/Lenti-4.酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染Hela细胞,运用RT-PCR和ELISA检测TGFβ1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 酶切和测序证实目的 寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6.2/Lenti质粒;与对照组相比,pRNA-U6.2/Lenti-1、pRNA-U6.2/Lenti-2转染Hela细胞后,TGFβ1 mRNA水平及蛋白水平的表达量均受到明显抑制;其中TGFβ1蛋白水平在pRNA-U6.2/Lenti-1组下降79.2%,在pRNA-U6.2/Lenti-2组下降53.7%,统计有显著性差异(P＜0.01).结论 成功构建了人TGFβ1基因RNAi质粒载体,对于TGFβ1高表达疾病的基因治疗奠定了基础. 相似文献