单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系

目的探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(C-C快速法)检测沙眼衣原体(CT),培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿道分泌物HSV2。结果NGU患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。NGU患者组和健康对照组的HSV2IgGI、gM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%,两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%,与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论HSV2是NGU的重要病原体之一。FQ-PCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察

目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测用 pLy D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果　经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗 pLy D的构建 ;实验小鼠产生了对HSV 1特异性的抗体 (抗体滴度 :ELISA法 1∶2 0 3,中和试验法 1∶37) ,并经受了HSV 1病毒的攻击 (存活率 :70 % )。结论　成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy D ,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应 ,并具有良好的保护作用。     

紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdrl、mrpl、GST-π、lrp和topo Ⅱ基因的表达

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系，观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdrl、mrpl、GST-π、lrp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药，采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549／TXL20；MTT法检测A549／TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数（RF）；细胞克隆形成法测定A549／TXL20对紫杉醇的敏感性；高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度；RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549／TXL20中DNA polβ、mdrl、GST-π、mrpl、lrp和topoⅡ的基因表达。站杲①A549／TXL20形态不规则，较亲本细胞略小，核／浆比增加，倍增时间没有明显变化；②A549／TXL20对紫杉醇的RF为19．3，对顺铂的RF为67．4，对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性；③A549／TXL20对紫杉醇的敏感性降低，其紫杉醇的含量较亲本细胞下降；④A549／TXL20细胞中 DNA polβ、mdrl、GST-π、mrpl、lrp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加，差异具有统计学意义（P〈0．05）。站论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549／TXL20，其耐药机制可能与mdrl、GST-π、mrpl、lrp和DNA polβ基因的高表达有关。     

两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析

目的比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs(miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法。方法取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用。选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno-miR-195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量。提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量。结果两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同。在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高。结论茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查。     

聚合酶链式反应方法筛查慢性阻塞性肺疾病常见致病菌

目的对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期及急性加重期(AECOPD)患者痰标本进行细菌学分析,筛查常见致病菌的感染情况,探索细菌感染与COPD发病及进展之间的关系。方法选择7种COPD常见致病菌(肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡它莫拉菌和鲍曼不动杆菌)的特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法,对42例COPD稳定期患者、66例AECOPD患者和11例正常人痰标本进行检测,筛查上述病原菌的感染情况。结果肺炎克雷伯杆菌在稳定期检出8例(19%),AECOPD检出4例(6.1%);铜绿假单胞菌在稳定期检出2例(4.8%),AECOPD检出11例(16.7%);肺炎链球菌在稳定期全部检出(100%),AECOPD检出26例(39.4%),正常对照组全部检出(100%);金黄色葡萄球菌在稳定期未检出,AECOPD检出6例(9.1%);流感嗜血杆菌在稳定期检出39例(92.9%),AECOPD检出51例(77.3%),正常对照组全部检出(100%)。正常对照组以下各菌均未检出。卡它莫拉菌在稳定期检出12例(28.6%),AECOPD检出6例(9.1%);鲍曼不动杆菌在稳定期检出3例(7.1%),AECOPD检出5例(7.6%)。肺炎克雷伯杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和卡它莫拉菌在COPD稳定期和AECOPD间的检出率差异有统计学意义(P<0.05),铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌在两组间的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。测序结果与检出结果一致。结论 COPD稳定期患者上呼吸道菌群水平接近正常人,而AECOPD患者明显降低。某些细菌感染是AECOPD发病的主要原因,但并非所有细菌感染都与COPD疾病进展有关。     

中国西北地区汉族人群5-羟色胺2A受体启动区多态性与心境障碍发病、性别、症状、自杀的相关性

目的探讨中国西北地区汉族人群5-羟色胺2A受体(-1438A/G)基因多态性与心境障碍的发病、性别、亚型以及自杀相关是否关联。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增技术测定160例患者(包括单相抑郁症和双相障碍-抑郁相)和160例正常对照的5-HTR2A的基因型和等位基因,分别验证各种基因型与心境障碍的性别、亚型、自杀的相关性。结果病例组的A/G、G/G基因型和G等位基因频数均高于正常对照组(47.5%vs.40.6%;38.7%vs.34.4%;62.5%vs.54.7%;均P<0.05),两组性别分层比较,女性组与男性病例组相比差异无统计学意义(P>0.05)。单相抑郁症与双相障碍-抑郁相两组间进行比较差异无统计学意义(P>0.05)。病例组有无自杀相关分层比较差异无统计学意义(P>0.05)。自杀相关性别分层比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国西北地区汉族人群5-HTR2A(-1438A/G)基因多态性与心境障碍的发病相关,主要是与单相抑郁症相关;A/G、G/G基因型可能是心境障碍的易感基因型,G等位基因可能是心境障碍的易感基因。     

PCR早期诊断结核性胸膜炎的临床价值

比较了PCR、涂片法、OT试验及胸膜活检4种方法诊断结核性胸膜炎的临床价值。结果显示：PCR法灵敏度为48％,显著高于其它诸法(P＜0．05或0．01),其特异度为91．6％,与其它诸法接近(P均＞0．05)。PCR法具有快速、灵敏、简便及不依赖结核菌培养等优点,应作为胸腔积液患者的常规检查项目。但其假阴性率、假阳性率分别达52％和8．4％,致其可信性受限。本文对产生假阴性和假阳性的原因进行了分析,并提出了减少假阴性和假阳性的方法。     

酪酪肽对胰腺癌细胞生长的抑制作用及Y受体在胰腺癌细胞的表达

目的 观察酪酪肽(PYY)对体外培养的人胰腺癌Miapaca-2细胞的生长抑制作用及Y受体在胰腺癌细胞的表达.方法 不同浓度的PYY分别作用于体外常规培养Miapaca-2细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,光镜观察细胞形态变化.RT-PCR法检测胰腺癌细胞Y受体亚型Y1、Y2、Y5mRNA表达.结果 PYY对Mi...