芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

利用孔压静探确定软土地基的强度

将孔压探头贯入近似为孔穴扩张的过程，通过对探头的受力分析，得到了由孔压静探确定的饱和软粘土的不排水剪切强度值，采用此方法对广东西部沿海高速公路二标段软土地基的强度进行了估算，并与十字板试验的测试值作了对比，验证了方法的可行性。     

错时:高峰小时会错出,也有错进

<正>错时是错开上下班高峰时间。一般上学高峰时间与上班高峰时间是错开的,且就近或住校读书居多,上学客流较小,高峰小时供求矛盾并不突出;而职工上下班量大,时间集中,设施容量饱和甚至超饱和,确实需要错时。错时,实际也是交通需求管理的措施之一。     

毛乌素地区风积粉细砂填料的改良应用

新建新街至恩格阿娄至陶利庙铁路（新恩陶铁路）由东向西逐步进入毛乌素沙漠腹地,路基填料设计中采用沿线储量丰富的风积粉细砂进行路基填筑。粉细砂粒径单一、级配不良,路基填筑时地基系数和压实系数不能达到规范要求,需要对其进行改良。结合本线特点,采取化学改良和物理改良相结合,分别使用水泥改良、生石灰改良和掺砂岩的措施进行粉细砂的改良填筑试验,从经济、技术和施工工艺等方面进行综合研究,得出适宜在全线范围、以至毛乌素地区推广采用的改良方案。     

山区高速铁路高陡边坡稳定性与变形分析

以某高速铁路高边坡为例,分别计算不同施工阶段滑面为圆弧面和折线面、坡体无水和饱和等各种条件下边坡的稳定性安全系数并分析影响规律。系统地计算施工过程中各种条件影响下坡体水平位移与垂直位移的大小和变化规律。研究结果表明:按现行高速铁路规范设计的边坡,其位移在可接受的范围内,开挖卸荷引起的回弹明显,位移最大值发生在施工最后阶段;地下水对坡体竖向位移值没有明显影响,但会增大水平位移,在地下水变化较大的山区和雨季施工时应引起注意,加强观测和预防措施;锚杆对控制岩质边坡局部位移有一定的作用。研究成果可用于指导该山区高速铁路的边坡设计,可供同类工程设计和施工参考。     

海相饱和软土地层盾构管片开裂分析及处治

管片是盾构法隧道施工中的重要装配构件,影响到隧道施工及后期运营的安全性。文章以宁波轨道交通1号线世纪大道-海晏北路区间隧道管片为对象,分析了在海相高流变饱和软土地层修建盾构隧道过程中管片开裂的现象及规律,并结合数值分析揭示了管片开裂部分原因,提出了控制管片开裂的相应措施,可为类似地层条件下的盾构掘进及管片开裂处治提供参考。     

动载下沥青路面超孔隙水压力分析

沥青路面结构内部的孔隙水在高速行车荷载的作用下形成的瞬时超孔隙水压力是造成路面水损害的重要原因。文中采用Hankel变换和波数域离散方法求解弹性饱和半空间体系的动力响应问题。分析了沥青路面在饱水状态下其内部孔隙水压力的变化规律以及弹性模量等材料参数变化时对孔隙水压力的影响。     

饱和土渗流的能量守恒原理

通过对饱和土的渗流进行能量守恒原理分析,提出了可以通过测量几个简单的物理量来确定坝体下游浸润面出逸点处渗透水流的实际流速和水力坡降。     

砂井地基排水固结问题的研究

用传统固结理论分析方法研究了砂井加固软土地基的单向、径向和三维固结问题.运用前人提出的各种排水条件下土层平均固结度的理论解U=1-α·e-βt,利用实测荷载-沉降曲线推算参数α,β,大大简化了砂井地基的固结度以及固结沉降量的推算,对施工有一定的指导意义.