综合护理干预在大剂量甲氨蝶呤治疗急性淋巴细胞白血病中的应用

目的:探讨综合护理干预在大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)中的应用。方法:将40例ALL患者分为观察组和对照组各20例,对照组采用常规护理,观察组给予规范化护理。比较两组MTX血药浓度的变化、四氢叶酸钙(CF)解救的总需求量及不良反应发生率。结果:观察组患者44 h MTX血药浓度明显低于对照组(P<0.05),所需CF解救的总量较对照组显著降低(P<0.05);观察组患者口腔溃疡的发生率与对照组相比明显降低(P<0.05),且两组口腔溃疡程度比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:规范化综合护理可促进ALL患者体内MTX的排泄、减少CF的解救量、降低口腔溃疡的发生率,从而减轻患者的痛苦、提高化疗耐受性。     

中西医结合治疗肝纤维化研究进展

肝纤维化主要是指各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉积的一种病理过程,多因酒精性肝炎、病毒性肝炎、血吸虫性肝病、脂肪肝等多种慢性肝病未经治愈发展所致,具有病情重、病程长、易发展为肝硬化等诸多特点。病理进程主要为慢性肝病→肝纤维化→肝硬化→肝癌。笔者现结合国内外研究资料,从西医、中医、中西医结合三方面综述肝纤维化的实验与临床研究进展如下。1肝纤维化发病机制     

脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究.方法 以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒.以脂质体Lipofectamine2000 转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot 及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位.结果 酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT PCR证实BDNF EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF EGFP融合蛋白存在. 结论成功构建了BDNF EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外.     

扩张型心肌病的自身免疫发病机理研究

本文应用淋巴细胞单克隆抗体,发现扩张型心肌病(DCM)外周血淋巴细胞亚群明显异常;同时用短寿命细胞法发现DCM 的抑制细胞功能明显减低,并与心功能不全之间存在明显的正相关。还发现DCM 患者循环中抗心肌抗体对培养的心肌细胞具有明显的细胞毒效应。DCM 可能是一个与病毒性心肌炎及遗传免疫缺陷有关的自身免疫病.     

增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立

目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性。结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光。加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP。激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm。结论Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础。     

葛根素对氧糖剥夺细胞模型CaM、CaMKⅡ、MECP2、BDNF及Akt表达的影响

目的研究葛根素对氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)血管性痴呆细胞模型细胞黏附分子(CaM)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、脑源性神经营养因子(BDNF)及Akt表达的影响。方法选取生长良好的PC12细胞传代、分化,行OGD准备血管性痴呆细胞模型,随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量葛根素组。MTT法测定细胞存活率并确定合适的葛根素干预浓度及OGD处理时间;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量评定细胞损伤程度,鉴定细胞模型;Western blot检测CaM、CaMKⅡ、MECP2、BDNF及Akt蛋白的表达水平。结果 PC12细胞存活率随OGD时间延长而逐渐降低,呈时间依赖性;PC12细胞存活率随葛根素浓度增加而逐渐升高,呈浓度依赖性。葛根素有效干预浓度为0.1～10μmol/L;OGD最佳处理时间为6h。与对照组相比,模型组LDH释放量明显增高(P<0.05);葛根素干预组LDH释放量随葛根素浓度增加而减少(P<0.05)。模型组CaM蛋白表达明显升高,BDNF表达量明显减少(P<0.05),MECP2表达及CaMKⅡ、Akt蛋白磷酸化水平均未见明显变化(P>0.05)。葛根素干预可下调CaM蛋白水平,提高MECP2、BDNF的表达及CaMKⅡ磷酸化水平,中、高剂量葛根素组亦能升高Akt蛋白磷酸化水平(P<0.05)。结论葛根素可能通过提高Ca2+-CaM复合物介导CaMKⅡ自身磷酸化水平,诱导MECP2磷酸化,上调BDNF的表达,激活下游PI3K-Akt通路,抑制凋亡基因及蛋白表达,发挥神经保护作用。     

基于数据库分析肾透明细胞癌中DLG5的表达及预后判定作用

目的通过研究DLG5(discs large homolog 5)在肾透明细胞癌(ccRCC)临床组织中的表达,阐明其对ccRCC诊断与预后的作用。方法结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库与基因表达综合(GEO)数据库、免疫组织化学法分析DLG5在ccRCC组织与正常肾组织中的表达差异,运用LinkedOmics、GEPIA、String-DB等分析DLG5表达与ccRCC临床病理指标、预后的关系及与其可能发生相互作用的蛋白网络。结果 ccRCC中DLG5 mRNA表达高于正常组织,LinkedOmics网站分析发现,其高表达患者总生存率低于低表达者(P=2.997×10~(-5));DLG5表达随TNM分期等级升高而增加;DLG5与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的相关系数R=0.19(P=1.1×10~(-6)),与RAD1表达的相关系数R=0.18(P=5.7×10~(-6)),均呈正相关。结论 DLG5高表达是ccRCC不良预后的指标,有望作为预测患者转移、复发、预后等的分子靶标。     

PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子

建立一种通过ＰＣＲ介导的单链法人工合成基因的新方法。方法采用固相亚磷酰胺法,化学合成广一长因子基因５’端半分子各寡核苷酸片段,其间按搭桥方式相接,通过重叠ＰＣＲ扩增的方法以获得全长半分子基因,再通过带酶切位点的两端引物扩增,以获得大量特异的半分子基因。     

慢性溃疡性结肠炎患者外周血NK细胞活性的研究

作者等研究了慢性溃疡性结肠炎患者外周血NK细胞活性,与正常对照组比较明显降低(P<0.01)。在活动期和非活动期以及中医辨证分型中的大肠湿热型,脾虚挟湿型,NK细胞活性无差异。在服用类固醇治疗的病例中,NK细胞活性多显示降低。     

滋养细胞疾患对甲状腺功能变化影响的初步观察

本组对112例滋养细胞肿瘤患者、47例正常孕妇、15例育龄妇女测定了TT_3、TT_4、~(125)I-T_3吸收比值。证实葡萄胎患者确有甲功增强现象,其TT_3、TT_4值与育龄妇女组相比,均有高度显著差异.112例中,1例恶性葡萄胎(以下简称恶葡)、1例绒毛膜上皮癌(以下简称绒癌)有甲亢临床表现,为脉洪及心动过速,且有心电图改变,但无眼球突出及震颤。文献一般认为滋养细胞肿瘤患者甲亢现象是由hCG刺激引起的,hCG作用于细胞膜上磷酸腺苷环化酶,通过第二信使CAMP促进甲状腺素的生成和分泌,但也有人认为甲亢不是由hCG引起的。本组材料发现hCG升高与甲功增强有一定相关性,但不能解释hCG滴度很高而无甲功增加的病例。