黄芪甲苷通过SIRT1/PGC-1α通路促进退变的髓核细胞增殖

目的探究黄芪甲苷对退变髓核细胞功能的影响及其作用机制。方法原代培养正常与退变髓核细胞并观察,免疫组化检测细胞中胶原蛋白Ⅱ(collagenⅡ)的表达;分别采用20、40、60、80μg/mL的黄芪甲苷处理细胞,通过CCK-8和MTT试剂盒检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1(PGC-1α)的表达及其乙酰化和磷酸化水平;比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、β-galactosidase和三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果与正常髓核细胞相比,退变髓核组织中坏死细胞更多,且collagenⅡ表达降低;细胞经不同浓度黄芪甲苷处理后,40μg/mL黄芪甲苷不仅能显著提高退变髓核细胞活力,促进细胞增殖并抑制其凋亡,而且能上调细胞中SIRT1、PGC-1α的蛋白表达和PGC-1α磷酸化水平,下调PGC-1α乙酰化水平,增加SOD和ATP含量,降低MDA和β-galactosidase含量。结论黄芪甲苷可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进髓核细胞的增殖和存活。     

沉默肝星状细胞神经菌毛素-1抑制肝癌生长的实验研究

目的探讨沉默肝星状细胞神经菌毛素-1(neuropilin-1,NRP-1)表达后,是否会影响其对肝癌的促生长作用,并初步探讨可能存在的作用机制。方法细胞免疫荧光及细胞荧光双重染色观察NRP-1在肝星状细胞LX2中的表达及其与血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)的共表达;MTT法检测沉默肝星状细胞NRP-1后对肝癌细胞体外增殖能力影响;建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,绘制生长曲线,免疫组化法观察各组瘤体α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、NRP-1、PDGFR-β表达强度的差异。结果 LX2表面存在NRP-1表达,且NRP-1与PDGFR-β共表达于LX2;沉默LX2NRP-1后对HepG2促增殖作用降低(P<0.05);NRP-1KG移植瘤体积较NRP-1CG、NRP-1NG小(P<0.05),进一步对各组瘤体行免疫组化染色并进行表达强度积分分析,发现NRP-1KG瘤体间质NRP-1、PDGFR-β表达均较NRP-1CG弱(χ~2=25.89,P<0.05;χ~2=28.12,P<0.05)。结论沉默肝星状细胞NRP-1表达后,其对肝癌细胞促增殖作用降低,在体内环境中其对肝癌皮下移植瘤促生长作用也降低,其机制与肝星状细胞活化减弱有关,而肝星状细胞NRP-1表面共受体PDGFR-β表达减弱也可能参与这一过程。     

新型肿瘤靶向纳米颗粒联合光动力治疗对人宫颈癌Hela细胞的体外杀伤作用

目的探讨新型肿瘤靶向纳米颗粒R11-SSPEI/miR-145联合光动力疗法对人宫颈癌Hela细胞的体外杀伤作用及可能的机制。方法 MTT检测R11-SSPEI/miR-145联合光动力疗法对Hela细胞的毒性作用;克隆形成实验检测细胞增殖状态;Annexin V-PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡;JC-1染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位及凋亡情况。DCFH-DA染色后用荧光显微镜及Cellular Reactive Oxygen Species Detection Assay Kit试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot检测Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、BIP的蛋白表达。流式细胞仪及MTT检测ROS抑制剂NAC作用于联合治疗组后Hela细胞内变化。结果 R11-SSPEI/miR-145可被Hela细胞高摄取。MTT结果显示R11-SSPEI/miR-145联合光动力疗法可显著抑制宫颈癌Hela细胞生长。克隆形成实验发现联合治疗组细胞增殖抑制作用显著高于空白对照组、单纯药物治疗组及单纯光照组(P=0.031)。Annexin V-PI双染后发现联合治疗可显著提高Hela细胞凋亡(P=0.014);JC-1荧光染色后发现联合治疗组细胞膜电位显著下降(P=0.023)。Western blot发现Bcl-2蛋白表达显著降低,而Caspase-3、Caspase-9、BIP表达显著增高(P<0.05)。联合治疗组ROS水平显著升高,且可被NAC抑制。NAC可部分挽救联合治疗引起的细胞凋亡。结论新型肿瘤靶向纳米颗粒R11-SSPEI/miR-145联合光动力疗法对Hela细胞具有良好的杀伤效应,增敏机制可能与R11-SSPEI/miR-145诱导大量自由基产生及内质网凋亡,进而启动凋亡基因程序有关。     

5种血清学标志物对急性呼吸窘迫综合征的诊断和预后预测价值

目的探讨血管生成素2(Ang-2)、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)、肺表面活性蛋白D(SP-D)、血管性血友病因子(vWF)、白介素8(IL-8)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者外周血水平变化和对ARDS诊断、预后预测的临床价值。方法选择两个医学中心重症医学科49例ARDS患者,同期50例非ARDS患者(对照组)作为研究对象,检测入科时(T_1)、诊断为ARDS时(T_2)血清标志物水平,记录临床基本资料。结果 ARDS组5种标志物水平较对照组增高(P<0.05),且T_2时间点高于T_1(P<0.05);除vWF(P>0.05)外,ARDS死亡组(n=17)标志物水平均高于存活组(n=32)。受试者工作特征曲线分析表明,单一标志物(T_1)诊断ARDS的最大曲线下面积(AUC)为0.816(95%CI:0.730, 0.902)(KL-6),联合诊断最大AUC为0.869(95%CI:0.795, 0.942)(KL-6+Ang-2);单一标志物(T_2)预测死亡的最大AUC 0.764(95%CI:0.627, 0.901)(IL-8),联合预测最大AUC 0.829(95%CI:0.715, 0.943)(IL-8+KL-6)。结论 5种血清标志物与重症患者ARDS的发生及预后密切相关。血清KL-6和Ang-2水平变化有助于诊断,血清IL-8与KL-6水平升高预示预后不良。     

白藜芦醇通过调节Hippo信号通路抑制胰腺星状细胞活化

目的探讨白藜芦醇对胰腺星状细胞活化的影响及Hippo信号通路的作用。方法组织块胰酶消化法提取原代胰腺星状细胞,给予白藜芦醇干预胰腺星状细胞,Western blot、免疫荧光染色检测胰腺星状细胞活化的指标,Transwell侵袭实验及Western blot检测间接共培养条件下胰腺癌细胞Panc-1侵袭能力及EMT指标E-cadherin,Vimentin的变化。结果白藜芦醇能够抑制胰腺星状细胞的活化,抑制α-SMA及YAP、CTGF及CYR61的表达;白藜芦醇干预后的胰腺星状细胞上清与胰腺癌细胞共培养后,Panc-1细胞侵袭能力降低(P<0.05),E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低(P<0.05)。结论白藜芦醇能够抑制胰腺星状细胞活化,并降低共培养条件下胰腺癌细胞Panc-1的侵袭能力和EMT转化。     

南极中山站室内外空气细菌浓度与免疫水平关系

对南极中山站空气细菌浓度调查结果平均值为:冬季室内291.42cfu/m~3、室外为0cfu/m~3,夏季室内190.13cfu/m~3、室外20.64cfu/m~3。越冬队员Ig和T细胞增殖率,较赴南极前明显下降,回国3个月IgG、M恢愎,IgA与T细胞增殖率尚未恢愎     

DNA碱基序列重组作为决定细胞分化一个环节的逻辑可能性

DNA碱基序列重组作为决定细胞分化的一个环节是可能的。这种重组可以是在DNA一条链上碱基序列的移换,也可以是不同链间乃至不同分子间片断的交换。但是,细胞分化并非单一因素作用的结果,而是基因、细胞质及细胞外环境作用系统相互作用与反作用的结果。     

甲状腺细胞的~3H-TdR摄取量测定的细胞因素影响

本文用TSH刺激FRTLS鼠甲状腺细胞,观察~3H-TdR掺入DNA的量,表达为每微克DNA内的~3H的每分钟放射计数(CPM/μgDNA)。细胞对刺激物的反应能力表达为刺激组细胞的~3H-TdR摄取值CPM/μgDNA除以对照组的CPM/μgDNA所得的“%的对照值”。-180℃冷冻2个月复苏的细胞对TSH200和2000μu/ml的反应能力分别为2741%和3028%,作为对比组的连续80天TSH培养的细胞反应能力分别为736%和719%,两组间存在统计学的显著差异。这提示用长期冷冻法可使因长期TSH培养而降低反应能力的细胞恢复良好的反应性。实验所需细胞数量应用一次种植、不经TSH增殖培养法,亦可提高细胞的反应性。     

细胞成像

长期以来，分子成像技术一直作为一种工具，用于药物作用靶点的探索过程中，通常是用在固定组织或者细胞样本的分析中，可见光显微镜，可以在亚微米等级上获得高度专一性的活细胞和固定细胞的无损三维图像，因此实验室中通常采用可见光显微镜来研究靶点在细胞表型中的作用。     

Ki-67，P53及HPV在眼睑结膜鳞状细胞癌2例的表达

我们对2例患的肿瘤组织切片，利用免疫组化及多酶链反应（Polymerase Chain Reaction.PCR）方法研究了Ki-67，P53，及人类乳头状瘤病毒（Human Papilloma Virus HPV）在眼睑、结膜鳞状细胞癌的表达报道如下。