视野变窄与交通安全

当人的眼睛平行注视前方的物体时,由眼底视心窝的视细胞发挥视觉功能,是中心视力,简称“视力”。     

siRNA下调AEG-1基因表达对胶质瘤细胞血管拟态形成的影响

目的探讨下调星型细胞上调基因-1(AEG-1)表达对胶质瘤细胞血管拟态(VM)形成的影响及其可能的机制。方法利用siRNA下调U87胶质瘤细胞中AEG-1表达,通过体外构建胶质瘤VM模型,研究下调AEG-1表达对胶质瘤VM形成的影响;Real-time PCR及Western blot分别检测AEG-1表达下调对U87细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA及蛋白表达的影响;免疫荧光法检测AEG-1表达下调对VM模型中VEGF及MMP2表达的影响。结果 siRNA下调AEG-1表达能显著降低U87细胞体外VM的形成(P<0.01),同时下调AEG-1基因能够显著抑制U87细胞及其构成的VM中VEGF及MMP2的表达(P<0.01)。结论 siRNA下调AEG-1表达能显著抑制胶质瘤细胞VM的形成,其部分机制可能是通过下调VEGF及MMP2表达实现。     

三七皂苷对激素性股骨头坏死早期细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨三七皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对激素性股骨头坏死(steonecrosis of the femoral head,SONFH)早期细胞凋亡的影响及其作用机制。方法选取健康成年新西兰兔24只,分为正常对照组、模型组及PNS组3组。模型组采用马血清(10mL/kg)加激素(40mg/kg)的方法建立兔SONFH模型;PNS组在模型组基础上同时给予PNS(50mg/kg)干预;正常对照组常规饲养。2周后处死动物取双侧股骨头进行脱钙包埋,TUNEL染色观察细胞内凋亡变化,BCA法检测股骨头内caspase-3活性变化,免疫组化及Western blot检测各组股骨头内Bax及Bcl-2含量的变化。结果 TUNEL染色结果发现,模型组骨组织内可见大量凋亡细胞,PNS组骨组织内凋亡细胞明显减少(P<0.05);与模型组相比,经PNS预处理后股骨头组织内的caspase-3活性明显下降(P<0.05);免疫组化染色及Western blot检测结果证实,模型组骨组织内Bax蛋白表达量明显增加,而Bcl-2蛋白表达量明显减少,而与之相反的是PNS组骨组织内检测到的Bax蛋白表达量明显下降(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论PNS可能通过增强Bcl-2表达,降低Bax表达,抑制caspase-3活性,减少早期SONFH股骨头组织内的细胞凋亡。     

aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞凋亡的促进作用

目的观察aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法使用不同浓度的aptamer-siRNA溶液转染K562细胞,噻唑蓝(MTT)法检测aptamer-siRNA对K562细胞增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测aptamer-siRNA对K562细胞凋亡的影响,Western blot和RT-PCR法检测aptamer-siRNA对K562细胞bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果与对照组相比,转染aptamer-siRNA后K562细胞增殖受到明显抑制,K562细胞的早期凋亡率明显增加,细胞中bcl-2蛋白和mRNA的表达水平明显降低,Bax和caspase-3蛋白和mRNA的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。aptamersiRNA核酸复合物浓度(50~250μmol/L)对bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA的影响具有明显的量效关系。结论aptamer-siRNA核酸复合物能够通过促使bcl-2基因减少和Bax、caspase-3基因增长,进而促进K562细胞凋亡。     

HEK293细胞中杂合状态下无义突变体L539fs/47对野生型HERG电流的作用

目的研究单独表达无功能的无义突变体L539fs/47在HEK293细胞中杂合状态下对野生型HERG电流的作用。方法用脂质体转染法将野生型HERG及突变体HERG-L539fs/47分别转染HEK293细胞36h后,RT-PCR检测HERG mRNA表达,免疫荧光及免疫印迹检测HERG蛋白定位及表达量,全细胞膜片钳检测IHERG电流密度。结果野生组HERG的mRNA表达量高于L539fs/47突变组(1.066±0.612 vs.0.254±0.397,P<0.01)。免疫荧光检测发现野生型HERG蛋白多于突变体,野生型HERG蛋白主要分布在细胞膜上;而HERG突变体蛋白大部分滞留胞质。免疫印迹显示:不同于野生型HERG135ku及155ku 2个条带,突变体仅60ku 1个条带。全细胞膜片钳检测WT+MT组IHERG较WT组下降55.23%(22.03±2.62 vs.49.20±2.31pApF,P<0.01)。结论 HEK293细胞中杂合状态下截断突变体L539fs/47对野生型HERG电流的不完全负显性抑制作用。     

贝前列素钠对低氧性肺动脉高压大鼠的作用及对肺动脉平滑肌氧敏感性K_V通道表达的影响

目的探讨贝前列素钠(BPS)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠的疗效,及其对肺动脉平滑肌氧敏感性KV通道表达的影响。方法采用在低压低氧舱内每日饲养8h的方法建立HPH大鼠模型;BPS干预组每日给予BPS灌胃[300μg/(kg·d)],对照组和模型组给予生理盐水灌胃;4周后测定平均肺动脉压力(mPAP),计算右心肥厚指数(RVHI),肺组织切片HE染色评价肺动脉壁增厚程度,Real-time PCR和Western blot检测肺小动脉平滑肌KV1.2、KV1.5、KV2.1mRNA和蛋白表达水平。结果连续4周低压低氧成功诱导HPH大鼠模型;与模型组相比,BPS干预后mPAP和RVHI降低[mPAP:(13.48±2.18)mmHg vs.(23.87±2.23)mmHg vs.(17.09±1.20)mmHg;RVHI:0.28±0.02 vs.0.46±0.03 vs.0.36±0.04;P<0.05];肺小动脉重构改善(中膜面积百分比:35.72±6.58 vs.68.52±5.64 vs.46.58±8.43,P<0.05),肺动脉平滑肌KV1.2、KV1.5、KV2.1mRNA和蛋白表达水平升高(蛋白相对表达量:KV1.2,0.78±0.10 vs.0.15±0.03 vs.0.57±0.13;KV1.5,0.61±0.10 vs.0.31±0.05 vs.0.59±0.13;KV2.1,0.29±0.05 vs.0.10±0.02 vs.0.28±0.07;P<0.05)。结论 BPS可改善HPH大鼠的肺动脉高压,并上调肺动脉平滑肌KV1.2、KV1.5、KV2.1的表达。     

急性髓系白血病免疫治疗的研究进展与展望

大多数急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者化疗诱导缓解后不可避免地面临复发。异基因造血干细胞移植作为AML最有效的治疗,通过免疫介导的移植物抗白血病效应根除白血病细胞,能有效预防AML复发。移植技术和单倍体移植模式进展使得"人人都能进行造血干细胞移植"。靶向治疗,如基因工程T细胞(嵌合抗原受体T细胞)、单克隆抗体、新型双特异性单抗,能特异性杀伤表达特殊抗原的白血病细胞,而不伤害正常细胞,将成为AML免疫治疗的新策略。研究发现高表达于急性单核细胞白血病细胞的新抗原急性单核细胞白血病相关抗原-34(monocytic leukemia associated antigen-34,MLAA-34)具有抗白血病细胞凋亡作用,且MLAA-34多肽可诱导特异性CTL杀伤活性,具有较强的免疫原性,MLAA-34可作为急性单核细胞白血病免疫治疗新的理想靶抗原。总之,新近进展有价值的免疫治疗白血病相关抗原的鉴定有可能根除化疗后白血病微小残留病变,有望降低AML复发,延长AML患者生存。     

聚羟基丙烯酸和Van-clear在qRT-PCR法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变中的应用研究

目的比较环保固定液聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合替代传统固定液4%中性缓冲甲醛、传统透明脱蜡液二甲苯应用于实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法,检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变率的敏感性、特异性及符合率的差异,评估qRT-PCR法及其环保技术平台的临床应用价值。方法选取中山市博爱医院、中山市中医院2013年5月至2016年3月期间手术切除的原发性NSCLC标本91例,同一肿瘤病变部位切取5个样本,采用随机数字表法分为A、B、C、D、E。A组使用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、直接测序法检测EGFR基因突变;B组使用4%中性缓冲甲醛固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;C组使用聚羟基丙烯酸固定、二甲苯透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;D组使用4%中性缓冲甲醛固定、Van-clear透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变;E组使用聚羟基丙烯酸固定、Van-clear透明脱蜡制作切片、qRT-PCR法检测EGFR基因突变。分别测定5组NSCLC中EGFR基因第18、19、20、21号外显子的突变情况。结果 (1)B、C、D、E组与A组比较,EGFR基因发生突变人数百分率、基因靶位点突变率的差异均无统计学意义(P>0.05);(2)B、C、D、E组与A组比较,EGFR靶位点突变检测结果的灵敏度好、特异度强、符合率高。结论聚羟基丙烯酸、环保透明脱蜡液Van-clear单独或联合替代传统试剂,应用于qRT-PCR法检测NSCLC中EGFR基因突变,与以传统试剂应用于直接测序法的检测结果一致性好,有在临床推广应用的意义和价值。     

齐墩果酸纳米粒与肝素钠纳米粒联合应用治疗肝癌的体内外研究

目的考察自制齐墩果酸纳米粒(OPTN)与自制肝素钠纳米粒(HPTN)联用后对肝癌的体内外抑制作用,并通过对比单独用药的结果,研究两药联用是否具有协同作用。方法以香豆素6和曙红为标记物,考察人肝癌细胞HepG2和小鼠腹水型肝癌细胞HCa-F对两种纳米粒的摄取情况,利用水溶性四氮唑(WST-1)法和流式细胞仪测定两药合用对HepG2的协同抑制作用以及细胞凋亡情况。体内通过测定肿瘤抑制率和苏木精&曙红染色(H&E)法评估两药合用后的抗肿瘤效果。结果经过4h的孵育,在HepG2细胞和HCa-F细胞里均能观测到纳米粒发出的荧光,表明包载药物和荧光标记物的纳米粒能被两种细胞摄取;OPTN与HPTN联用能协同抑制肝癌细胞的活性;体内试验结果表明两药联用后能有效抑制肿瘤生长。结论 OPTN与HPTN联用后能产生协同作用,有效抑制肝癌细胞及肝癌实体瘤的生长,作用明显强于单独用药。     

龙葵素通过ROS/p38信号通路诱导人前列腺癌细胞凋亡

目的探讨龙葵素对前列腺癌细胞Du145和LNCaP凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测龙葵素对Du145和LNCaP细胞活力的影响,流式细胞术检测龙葵素对Du145和LNCaP细胞中活性氧的生成及细胞凋亡的影响,Western印迹法检测龙葵素对细胞内p38和p-p38蛋白水平的影响。结果龙葵素能显著抑制Du145和LNCaP细胞的细胞活力,且呈现剂量依赖性(P<0.01),ROS清除剂NAC能显著抑制龙葵素对细胞活力的抑制作用。40μmol/L龙葵素作用细胞24h能诱导细胞ROS生成和细胞凋亡,并促进p38磷酸化,NAC能显著抑制龙葵素诱导的细胞凋亡和p38的磷酸化,p38磷酸化抑制剂能够显著抑制龙葵素诱导的细胞凋亡。结论龙葵素诱导ROS的产生,通过激活p38通路诱导人前列腺癌细胞凋亡。