双重特异性磷酸酶15基因对吗啡敏化的调控作用

目的研究小鼠伏隔核(nucleus accumbens, NAc)中双重特异性磷酸酶15(dual-specificity phosphatase 15,DUSP15)在吗啡敏化中的作用。方法观察吗啡对小鼠自主活动及急性吗啡诱导小鼠活动的增强效应。采用Western blotting检测小鼠NAc中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)、p-ERK和DUSP15的表达。利用脑立体定位微量注射技术向小鼠NAc注射DUSP15过表达病毒(AAV-DUSP15),免疫荧光染色明确病毒表达。Western blotting检测AAV-DUSP15对DUSP15、ERK与p-ERK表达的影响;旷场实验评估小鼠自主活动情况。结果 小鼠腹腔连续注射10 mg/kg吗啡7 d(连续注射1针/d),停药1周可诱导小鼠敏化行为。与盐水对照组相比,吗啡组小鼠ERK活化水平增高(p-ERK/ERK),DUSP15表达水平降低。与盐水对照组相比,向吗啡小鼠NAc注射AAV-DUSP15,DUSP15表达水平显著增高,ERK活化水平显著降低;...     

基于细胞图像局部分布特性的粘连分割技术研究

在医用显微图像中,针对重叠和粘连在一起的细胞图像,根据其局部分布特性,在距离变换的基础上提出了一种新的基于图像局部像素分布的分割方法。实验结果表明,该方法简单易行,鲁棒性强,具有较好的分割效果。     

大量黄腐酸对大鼠肝匀浆脂质过氧化物和细胞色素P-450含量的影响

以黄腐酸（Ｆｕｌｖｉｃａｃｉｄ,ＦＡ）大剂量授予大鼠,拟复制大骨节病（ＫａｓｃｈｉｎＢｅｃｋＤｉｓｅａｓｅ,ＫＢＤ）动物模型,通过两项生化指标的量变值对ＦＡ的毒性做出评价。在低硒条件下,以病区和非病区ＦＡ１００ｍｇ／Ｌ两类饮水分别致大鼠ＫＢＤ模型实验２８ｄ。ＦＡ剂量为每公斤体重１０ｍｇ／ｄ,等于病区儿童每公斤体重摄入量的１０００倍。实验终结时大鼠肝匀浆脂质过氧化物丙二醛及细胞色素Ｐ－４５０含量均无显著变化,表明含有上述两类ＦＡ的饮水均未能对机体产生有害作用。     

重组人纤维连接蛋白对无血清培养的CIK细胞增殖及对K562细胞杀伤活性的影响

目的探讨重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)诱导的细胞因子诱导的杀伤细胞CIK增殖、免疫特性及对人类K562细胞杀伤活性的影响。方法密度梯度分离法分离外周血单个核细胞后分成两组,应用CD3单抗、IFN-γ、IL-2培养CIK细胞,一组含RN(RN组),一组不含RN(Non-RN组)。记录两组细胞增殖速度;用流式细胞术动态测定免疫细胞表型;用CBA细胞因子试剂盒检测IFN-γ、TNF-α及IL-4的分泌;用CFSE/PI双标法测定CIK细胞对人红白血病细胞株(K562)的体外杀伤活性。结果 RN组细胞生长明显快于Non-RN组(P<0.05);CD3+CD8+的细胞随着时间的延长逐渐增多,但两组间比较无统计学差异;CD3+CD56+细胞所占百分比在第5天和第10天时两组间比较均无统计学差异(P>0.05),在第15天时RN组有大幅度升高,第15、20、25天两组比较均有统计学差异(P<0.05)。细胞毒杀伤活性结果显示,RN组与Non-RN组对K562细胞毒活性亦有统计学差异。两组间细胞因子IFN-γ、TNF-α随着培养时间的延长,分泌量逐渐升高。结论使用RN诱导的CIK细胞增殖速度快,杀伤肿瘤细胞活性高,是一种安全高效的细胞培养方法。     

苯妥英钠对大鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的观察苯妥英钠(PHT)对大鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(腹腔注射灭菌生理盐水1mL)和0、5、25、50、100mg/mL PHT组(腹腔注射上述质量浓度PHT),连续28d;监测PHT血药浓度;29d处死大鼠,制作牙龈组织切片,采用原位脱氧核糖核苷酸末端标记法(TUNEL)检测牙龈上皮细胞的凋亡情况;采用免疫组织化学方法检测牙龈上皮细胞Ki-67的表达。结果实验组凋亡指数(AI)显著低于对照组(P<0.01),而增殖指数(PI)显著高于对照组(P<0.01);PHT血药浓度与AI呈显著负相关(r=-0.98),与PI呈显著正相关(r=0.976)。结论 PHT通过抑制牙龈上皮细胞凋亡和促进细胞增殖,导致牙龈上皮的增生;PHT血药浓度与增生程度可能存在关联。     

经熟地鳖甲煎剂含药血清培养的肾系膜细胞对成骨细胞增殖和分化的影响

目的研究经熟地鳖甲煎剂含药血清培养的肾小球系膜细胞培养上清液对成骨细胞的影响。方法采用细胞培养的方法,将成骨细胞分为正常血清组、系膜上清组、含药系膜上清组,分别在培养24、48、72、120h后应用MTT法检测各组成骨细胞的增殖情况;在72h后应用ELISA法检测上清液碱性磷酸酶(AKP)和骨桥蛋白(OPN)浓度。结果系膜上清组和含药系膜上清组的成骨细胞增殖显著高于正常血清组(P<0.05),而含药系膜上清组又高于系膜上清组(P<0.05)。系膜上清组和含药系膜上清组的AKP浓度显著高于正常血清组(P<0.05),含药系膜上清组又显著高于系膜上清组(P<0.05)。含药系膜上清组的OPN浓度要显著高于正常血清组(P<0.05)。结论肾系膜细胞可促进成骨细胞的增殖及功能,而熟地鳖甲煎剂能促进这一作用。本研究为中医"肾主骨"理论体系提供了新的实验方法及科学依据。     

奈达铂体外诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制

目的探讨奈达铂(NDP)体外对人肺腺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法采用四氮甲唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的NDP对A549细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达情况。结果 NDP能显著抑制A549细胞的生长;FCM结果显示,10μg/mL NDP作用A549细胞48h后,与对照组相比,细胞凋亡明显增加[(25.14±3.97)%vs.(8.01±1.46)%];S期细胞的比例增加[(52.73±1.66)%vs.(38.38±3.91)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Bax、Caspase-3、Caspase-9表达增加(P<0.05)。结论 NDP可抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、细胞S期阻滞及上调Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达有关。     

siRNA阻断NF-κB信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖及侵袭

目的采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调胃癌细胞株SGC-7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖活性和侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB p65的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染入胃癌细胞株SGC-7901中。采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变;采用MTT法测定细胞增殖活性的变化;利用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果与对照组比较,化学合成的人NF-κB p65siRNA能有效地抑制SGC-7901细胞中NF-κB p65mRNA的表达(P<0.05);RelAsiRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P<0.05),并且RelA siRNA组中SGC-7901细胞的体外侵袭力减弱,增殖活性降低。结论特异的siRNA可以有效阻断NF-κB信号通路,影响人胃癌细胞的增殖活性和体外侵袭能力。     

κ-阿片受体激动剂防治低氧性肺动脉高压的研究进展与展望

低氧性肺动脉高压(HPH)尚缺乏较为理想的治疗方法。预防内皮功能失调和抑制平滑肌细胞的增殖是防治HPH新的潜在策略。κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50、488H既可以内皮依赖性地舒张正常大鼠的肺动脉又可显著舒张HPH大鼠的肺动脉,其作用机制与电压依赖性钾通道(KV通道)及一氧化氮(NO)途径密切相关,预防性给予U50、488H可显著升高HPH大鼠血液及肺组织NO水平的同时,降低内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,显著改善低氧诱导的内皮功能失调,另一方面发现U50、488H能有效降低HPH大鼠的平均肺动脉压(mPAP),并能明显减轻HPH大鼠的肺血管重建和右心室肥厚程度。另外,U50、488H可抑制低氧下的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖,这可能是其抑制肺血管重建的原因,提示U50、488H对大鼠HPH具有明确的防治作用。U50、488H内皮依赖性的舒张肺动脉、降低肺动脉压、改善内皮功能失调及抑制PASMC增殖等作用均由κ-OR所介导,提示κ-OR有可能成为临床防治HPH新的药理学靶点。     

SIRT4在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的检测原发性肝癌组织及配对癌旁组织中沉默调节蛋白SIRT4的表达,及其与原发性肝癌临床病理因素的关系;探索SIRT4对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和对上皮间质转化能力的影响。方法 qRT-PCR检测SIRT4在肝癌组织和癌旁组织中的表达;卡方检验(χ~2)分析SIRT4表达与肝癌临床病理因素之间的关系;利用慢病毒转染技术构建SIRT4表达上调的SMMC-7721肝癌细胞系;MTT和Transwell小室观察SIRT4表达对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测SIRT4对细胞转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)和上皮间质转化相关蛋白表达的调控作用。结果原发性肝癌组织中的SIRT4表达明显低于癌旁组织(P<0.01),SIRT4低表达与肝癌的临床病理因素密切相关;过表达SIRT4抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化能力。结论 SIRT4在原发性肝癌中可能扮演抑癌基因角色,并可成为肝癌的潜在生物标记物和治疗靶点。