CLONING AND EXPRESSION OF A GENE MEDIATING γ-RADIATION-INDUCED APOPTOSIS IN HL-60 CELLS

Apoptosis,orprogrammedcelldeath(PCD),isanintricatelyregulatedprocess">.Geneticstud-iesofapoptosisinCaenorhabditiseleganshavei-dentifiedced-3andced-4asproapoptoticgenesandced-9asanantiapoptoticgene"=-Severalmam-malianhomologuesofced-3,ced-4andced-9havebeenidentified.Recentstudiesindicatethatthefundamentalapoptosismachinery,whichconsistsofdistincteffectors,inhibitorsandinitiators,hasbeenconservedthroughoutevolution.Thekeyapoptosiseffectorsinmammalsareafamilyofcys-teine-containing,aspartate-spe…     

人GLUT4基因的克隆及原核表达的初步实验研究

目的　通过反转录聚合酶链方法 ,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子 4 (GLUT4 )cDNA基因 ,并分别克隆入测序载体、表达载体 ,获得具有正确序列的目的基因及其原核表达产物 ,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定物质基础。方法　经GenBank在线检索 ,设计、确定人GLUT4cDNA基因特异引物 ,采用反转录聚合酶链 (RT PCR)方法从一例手术的人新鲜腹部肌肉组织总RNA模板中 ,获得人GLUT4表达片段cDNA的基因 ,经克隆入测序载体pGEM 3zf(- )测序 ,验证cDNA大小、完整性及序列。再克隆入表达载体 pBV2 2 0 ,经温度诱导 ,在E .coli获得表达。结果　以设计的特异引物 ,从人肌肉组织模板中能得到预期大小完整的人GLUT4cDNA基因 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列与目的基因的序列相符。所获GLUT4cDNA基因插入原核非融合表达载体pBV2 2 0 ,获得预期大小的重组表达产物。结论　从人肌肉组织中能获得具有正确序列、含完整起始及终止密码的人GLUT4cDNA基因。该人GLUT4cDNA基因的体外重组体能在原核表达系统表达     

用碱性裂解法提取人血凝块中基因组DNA

目的建立一种新的从人血凝块中提取基因组DNA的方法。方法血凝块于室温自然解冻,匀浆,碱消化,酚氯仿抽提,电泳检测。结果用碱性裂解法从人血凝块中成功提取到基因组DNA,提取的DNA质量浓度平均为0.46 g/L,且吸光度比值A260/A280>1.8,选取人Gpx-1基因作PCR获得满意的目的片段。结论用碱性裂解法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的应用于血凝块基因组DNA的提取。     

正己烷致大鼠脂质过氧化及肝细胞DNA损伤的实验研究

目的研究正己烷(n-hexane)对大鼠的脂质过氧化作用和肝细胞DNA损伤的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分成5组,即阴性对照组、75、150、300 mg/kg染毒组和阳性对照组,每组8只。经腹腔注射染毒4周后,检测肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力,血清还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;用彗星试验技术(SCGE)检测大鼠肝细胞DNA的损伤。结果大鼠体重随染毒时间而增加,阴性对照组增加最快;随染毒剂量增加,肝组织匀浆中SOD、GSH-Px活力、血清GSH含量明显降低,而血清MDA含量增大,组间比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);肝细胞SCGE检测彗星尾长、尾DNA(%)、尾矩、Olive尾矩均增大,组间比较有显著性差异(P<0.01),尾矩值与染毒剂量作相关分析,相关系数r为0.981,呈正相关(P<0.05)。结论正己烷可引起或增强机体氧自由基反应,导致脂质过氧化损伤和肝细胞DNA损伤。     

致癌物染毒大鼠体内DNA加合物的检测

本文报道了我们用联苯胺以及联苯胺衍生偶氮染料刚果红,依文思蓝经口染毒大鼠后用~(32)P后标记方法对其肝脏中的DNA加合物的检测结果,3种物质均检出1种DNA加合物,其含量分别为18.17,1.03,1.74μmol/kgDNA。结果表明联苯胺衍生偶氮染料经偶氮还原产生的联苯胺或联苯胺衍生物,能同联苯胺样在大鼠肝内形成加合物,这种DNA加合物很可能是接触联苯胺衍生偶氮染料的人群膀胱癌发病高的原因。     

蟾酥脂质体对小鼠膀胱原位移植性膀胱癌的抗癌作用研究

观察了蟾酥脂质体对小鼠膀胱原位移植性膀胱移行细胞癌的生长、癌细胞核原位ＤＮＡ含量、指数和组织学改变的影响，实验结果显示：经不同途经注射蟾酥脂质体８次后，小鼠膀胱原位移植癌的瘤重抑制率最高为６１．７％；癌细胞核原位ＤＮＡ含量及指数显著下降；移植癌内及周围有广泛出血坏死和带状淋巴、浆细胞浸润。认为该药的抗癌机理与减少癌细胞核ＤＮＡ合成及增强局部免疫功能有关。     

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备     

基于加权相对熵的二阶马尔可夫模型的进化树重构

利用加权相对熵的二阶马尔可夫模型的基本原理,对DNA序列进行比较.DNA序列由4个字符A、T、C、G构成的序列,将其视为一个马尔可夫链,取状态空间Ι={A,T,C,G},使用二阶转移概率矩阵来描述DNA序列,得到DNA序列的特征值,进而利用特征值定义DNA序列的相似性度量,得到能够对DNA序列进行比较的新方法,并利用这个方法对30个物种的线粒体DNA序列进行分类,通过加权相对熵得到距离矩阵的非比对方法构建的进化树划分更加清晰,准确度更高.     

高速铁路路基变形数据处理系统研究与应用

针对我国无砟轨道路基沉降观测数据管理及分析中存在的问题,通过文件DNA识别技术、平差模型建立、稳定性分析等关键技术的研究,自主开发了一套规范化和系统化的高速铁路路基沉降观测数据处理软件,集成了分析解决问题的方法,实现了沉降观测与评估的一体化,使沉降数据分析更科学、更严谨,提高了工作效率。该软件经测试,各项功能和性能满足要求,已成功应用于京沪、京石、石武和合福等高速客运专线铁路;也可用于其它建筑的沉降数据处理。