致癌物染毒大鼠体内DNA加合物的检测

本文报道了我们用联苯胺以及联苯胺衍生偶氮染料刚果红,依文思蓝经口染毒大鼠后用~(32)P后标记方法对其肝脏中的DNA加合物的检测结果,3种物质均检出1种DNA加合物,其含量分别为18.17,1.03,1.74μmol/kgDNA。结果表明联苯胺衍生偶氮染料经偶氮还原产生的联苯胺或联苯胺衍生物,能同联苯胺样在大鼠肝内形成加合物,这种DNA加合物很可能是接触联苯胺衍生偶氮染料的人群膀胱癌发病高的原因。     

蟾酥脂质体对小鼠膀胱原位移植性膀胱癌的抗癌作用研究

观察了蟾酥脂质体对小鼠膀胱原位移植性膀胱移行细胞癌的生长、癌细胞核原位ＤＮＡ含量、指数和组织学改变的影响，实验结果显示：经不同途经注射蟾酥脂质体８次后，小鼠膀胱原位移植癌的瘤重抑制率最高为６１．７％；癌细胞核原位ＤＮＡ含量及指数显著下降；移植癌内及周围有广泛出血坏死和带状淋巴、浆细胞浸润。认为该药的抗癌机理与减少癌细胞核ＤＮＡ合成及增强局部免疫功能有关。     

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备     

基于加权相对熵的二阶马尔可夫模型的进化树重构

利用加权相对熵的二阶马尔可夫模型的基本原理,对DNA序列进行比较.DNA序列由4个字符A、T、C、G构成的序列,将其视为一个马尔可夫链,取状态空间Ι={A,T,C,G},使用二阶转移概率矩阵来描述DNA序列,得到DNA序列的特征值,进而利用特征值定义DNA序列的相似性度量,得到能够对DNA序列进行比较的新方法,并利用这个方法对30个物种的线粒体DNA序列进行分类,通过加权相对熵得到距离矩阵的非比对方法构建的进化树划分更加清晰,准确度更高.     

高速铁路路基变形数据处理系统研究与应用

针对我国无砟轨道路基沉降观测数据管理及分析中存在的问题,通过文件DNA识别技术、平差模型建立、稳定性分析等关键技术的研究,自主开发了一套规范化和系统化的高速铁路路基沉降观测数据处理软件,集成了分析解决问题的方法,实现了沉降观测与评估的一体化,使沉降数据分析更科学、更严谨,提高了工作效率。该软件经测试,各项功能和性能满足要求,已成功应用于京沪、京石、石武和合福等高速客运专线铁路;也可用于其它建筑的沉降数据处理。     

大鼠海马组织RNA、DNA和蛋白质共提取方法的研究

目的探讨Trizol法同时提取大鼠单侧海马组织RNA、基因组DNA和蛋白质的可行性及优势。方法 Trizol法提取成年雄性Sprague-Dawley大鼠单侧海马组织RNA、基因组DNA以及蛋白质;商业化试剂盒提取另一侧海马组织基因组DNA,RIPA裂解液提取蛋白质。用超微量分光光度计和SYBR实时定量RT-PCR法检测Trizol法提取的RNA的质量,利用超微量分光光度计和聚合酶链式反应(PCR)法比较两种方法提取DNA的效果及质量,采用Western blot法比较两种方法提取蛋白质的效果。结果 Trizol法提取单侧海马RNA的质量浓度介于1 178.3² 225.8ng/μL之间,A260/280介于2.012 225.8ng/μL之间,A260/280介于2.01².03,A260/230介于1.882.03,A260/230介于1.88².22,并获得了稳定的β-actin和GR循环域值。Trizol法和试剂盒提取单侧海马DNA的质量浓度分别介于215.72.22,并获得了稳定的β-actin和GR循环域值。Trizol法和试剂盒提取单侧海马DNA的质量浓度分别介于215.7²71.8ng/μL和268.6271.8ng/μL和268.6⁸72.5ng/μL之间,均适于充当PCR反应模板。Trizol法和RIPA裂解液提取的蛋白质在Western blot法检测目的蛋白含量的过程中均呈现清晰的条带。结论 Trizol法提取大鼠单侧海马组织RNA的同时提取的DNA和蛋白质,与商业化试剂盒和RIPA裂解液从不同海马组织中分别提取基因组DNA和蛋白质的效果相当。采用Trizol法同时提取海马组织的RNA、DNA和蛋白质,不仅提高了实验效率、节约了实验成本,而且有效避免了因反复实验操作带来的人为干扰及误差。     

Asymmetric PCR method in generation of HBV ssDNA for pyrosequencing

Objective To explore the optimal primer ratio and concentration of asymmetric polymerase chain reaction (A-PCR) in producing hepatitis B virus (HBV) single-stranded DNA (ssDNA) for pyrosequencing. Methods A-PCR was carried out to generate HBV ssDNA with forward to reverse primers of different ratios (50 : 1, 100 : 1) and concentrations (13. 0 pmol/25μL and 0.14 pmol/25μL, 19. 5 pmol/25μL and 0. 21 pmol/25μL), and the product yield and quality were compared respectively. Results The forward to reverse primer ratio of 50 : 1 provided better yield and concentration of 19. 5 pmol/25μL and 0. 21 pmol//25μL generated a clearer band. Conclusion A simple and feasible method to produce HBV ssDNA for pyrosequencing in batch is established.     

基于DNA双链特征的启动子预测方法

真核启动子预测是DNA序列分析的重要问题之一．本文提出一个基于内容的新算法,考虑DNA的双链特征,特征的出现频率用位置权矩阵表示,利用boosting算法进行训练和预测,得出的结果与其他算法相比,有很好的敏感性和特异性．     

2型腺伴随病毒基因治疗载体的构建

目的　构建一种适用于中枢神经系统疾病的基因治疗载体。方法　以野生型 2型腺伴随病毒 (AAV 2 )质粒pssv9int 及逆转录病毒载体质粒plxsn为基本元件 ,利用重组DNA技术 ,构建了一种通用型AAV载体质粒pssHG Neo。结果　该质粒除含有必备的原核细胞复制子及Ampr 筛选基因外 ,还含有真核细胞筛选基因———Neor 及供插入目的基因的多克隆位点 (MCS) ,在MCS的上游为逆转录病毒的长末端重复序列 (5’LTR) ,具有启动子的功能 ,启动定向插入到MCS的外源目的基因。质粒中的AAV反向末端重复序列 (ITR)具有定点整合于人基因组 1 9号染色体S1位点的特点。结论　AAV载体是具有广阔前景的基因治疗载体     

DETECTION OF HPVB19 IN SERA OF KASHIN-BECK DISEASE PATIENTS

ＴｈｅＰａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅａｒｅａｆａｍｉｌｙｏｆｓｍａｌｌＤＮＡｖｉｒｕｓｅｓｗｉｔｈｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ,ｌｉｎｅａｒｇｅｎｏｍｅｓａｐｐｒｏｘｉ ｍａｔｅｌｙ 5 0 0 0ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ(ｎｔ)ｉｎｌｅｎｇｔｈ .Ｔｈｅｙｉｎｆｅｃｔａｖａｒｉｅｔｙｏｆｈｏｓｔｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ ,ｂｉｒｄｓａｎｄｍａｍｍａｌｓ ,ｂｕｔｏｎｌｙｐａｒｖｏｖｉｒｕｓＢ19ｉｓｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｔｏｈｕ ｍａｎｂｅｉｎｇ .Ｔｈｅａｇｅｎｔｗａｓｆｉｒｓｔｒｅｃｏｇｎｉｚｅ…