慢病毒载体介导GFP标记大鼠骨髓间充质干细胞

目的 探究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的理想条件,以获得稳定高表达GFP的MSCs亚群.方法 慢病毒载体介导GFP以25、50、100、200和400的感染复数(multiplicity of infection, MOI)分别作用12h和24h感染MSCs,倒置荧光显微镜及流式细胞术检测各组的感染效率和荧光强度,MTT法评价感染对MSCs增殖的影响,从而确定理想的感染条件.平皿克隆套环法挑选理想条件下感染的MSCs单克隆.结果 MOI为100、200和400作用24h时,感染效率较高,分别为88.94%、99.65%、99.42%;MOI为100和200时,感染对MSCs增殖无影响,MOI为400时,感染的MSCs增殖减慢.挑选MOI为200、作用24h感染组的单克隆细胞,其1月时感染效率为99.95%,且荧光均一、强度很强.结论 MOI为200作用24h是慢病毒载体介导GFP标记MSCs的理想条件;通过细胞单克隆技术可获得稳定高表达GFP的MSCs亚群.     

定向基因传递载体pET15b-Z-VP1的构建

目的 在JCV VP1氨基末端插入SPA的IgG结合区(Z区),构建原核表达质粒pET15b-Z-VP1.方法 PCR扩增JCV基因组VP1和SPA基因的Z片段;重组PCR连接Z片段和VP1;BamHⅠ和NcoⅠ双酶切将Z-VP1片段插入原核表达质粒pET15b.结果经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳纯化,分别得到VP1和Z片段;再用重组PCR将Z片段和VP1连接成Z-VP1重组基因;双酶切将Z-VP1插入pET15b的BamHⅠ和NcoⅠ两个酶切位点之间,并经酶切鉴定和DNA测序证实.Western blotting证明pET15b-Z-VP1在体外表达重组蛋白VP1-Z.结论成功在VP1氨基末端插入Z区,构建了原核表达质粒pET15b-Z-VP1,并体外表达重组蛋白VP1-Z.     

慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞

目的分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs),探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)感染兔BMSCs的最佳条件,筛选稳定转染的兔BMSCs。方法通过全骨髓贴壁法获得兔BMSCs;茜素红、甲苯胺蓝及油红O染色对BMSCs成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;免疫荧光组化染色检测CD44及CD90的表达;不同浓度嘌呤霉素筛选BMSCs的最小致死浓度;以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为50、100、150、200的慢病毒载体介导eGFP转染BMSCs,倒置显微镜下观察荧光表达,并用嘌呤霉素筛出稳定转染系。结果当MOI为150,慢病毒载体介导eGFP感染兔BMSCs效率最高;嘌呤霉素筛选稳定转染兔BMSCs的最适质量浓度是1.0μg/mL。结论成功培养了兔BMSCs,用慢病毒介导的GFP标记了兔BMSCs并筛选出了稳定转染的兔BMSCs,建立了一个简便有效的干细胞标记方法,为BMSCs在动物体内实验标记示踪奠定了基础。     

Ki-67，P53及HPV在眼睑结膜鳞状细胞癌2例的表达

我们对2例患的肿瘤组织切片，利用免疫组化及多酶链反应（Polymerase Chain Reaction.PCR）方法研究了Ki-67，P53，及人类乳头状瘤病毒（Human Papilloma Virus HPV）在眼睑、结膜鳞状细胞癌的表达报道如下。     

船舶无线通信系统病毒入侵传播路径检测

利用传统方法对船舶无线通信系统病毒入侵传播路径进行检测,存在检测率低的问题。针对上述问题,提出一种新的病毒入侵传播路径检测方法。方法主要分为4步:1)利用采集系统对船舶无线通信系统中的数据进行采集;2)对采集到的数据进行处理,包括初步筛选处理、噪声消除、缺值处理、属性选取、数据标准化和归一化处理等;3)将处理好的数据输入到优化后的神经网络当中,进行入侵传播路径检测;4)根据检测结果进行入侵响应。结果表明:与基于人工免疫方法、基于数据挖掘方法及基于机器学习方法相比,本方法的平均检测率分别提高9%,12.7%,15.3%。     

一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价

目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法BALB/c小鼠100只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。观察小鼠哮喘急性发作症状;动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示);支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理变化。结果①以45、135、405μg/mL Ach激发时,与其他各组比较,OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01);②BALF中炎性细胞分类计数,与其他各组比较,OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01);③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。结论RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。     

大骨节病病因病理学研究

目的 寻找并认定大骨节病(Kashin-Beck disease, KBD)的病因。方法 复查本所KBD剖检档案16例的骨切片。光镜观察KBD患儿末梢血涂片中白细胞的病变,电镜观察患儿白细胞的超微病变。观察KBD患儿血浆引发培养兔软骨细胞损伤的实验结果。结果 KBD剖检例的软骨细胞、骨髓血细胞及KBD患儿的白细胞,这三类细胞病变的特征及其全过程完全一致,均显示特异的凝固性坏死,细胞核增大,核内出现由少到多、由小到大的嗜酸性(红色)包涵体,伴随以细胞核染色质的溶解减少;若病变持续恶化进展,则整个细胞核可转化成一个红染的大团块;其后出现该包涵体的后续性系列变化;细胞体缩小,细胞质红染。患儿血浆引发培养兔软骨细胞复制出等同于剖检例软骨细胞特异坏死病变的细胞模型,且在其细胞核内检可见病毒核衣壳。在患儿白细胞的核内亦可见相同的病毒核衣壳。在剖检例的骨髓内可见充血、水肿、纤维素渗出,造血主质和骨小梁的灶性坏死以及骨髓纤维化等。结论 在KBD剖检例病变的软骨细胞和骨髓血细胞的核内及KBD病患儿末梢血白细胞的核内均显示相同的包涵体形成;包涵体形成是病毒杀细胞性感染最为熟知的病理形态学结果;特别是以KB...     

防止新冠疫情扩散的城市交通系统与出行活动管控策略

提出了一套以现有资源与技术为基础、以防止大规模传染性病毒扩散为目的、以减少出行人群近距离接触为手段、适应疫情防控特殊要求的综合城市交通系统与出行活动管控框架与措施.此管控研究框架里的主要措施包括四个方面:①出行需求管理(包括不同管控条件下的强制性和引导性的出行需求管理措施);②交通系统控制(在空间与时间上限制或调整某些...     

整体防毒策略在DFL网络中的应用

介绍了趋势科技的整体防毒策略在DFL(东风有限)网络中的具体实施及应用,为企业防毒提供了参考。     

2006-2015年陕西省其他感染性腹泻流行病学特征分析

目的分析2006-2015年陕西省10年间其他感染性腹泻报告病例的流行病学特征,为其防控提供科学依据和本底数据。方法通过国家"疾病监测信息报告管理系统",对陕西省2006-2015年上报的其他感染性腹泻病例进行特征描述。结果 2006-2015年陕西省共报告其他感染性腹泻207 437例,10年平均年发病率约为52.43/10万,其中男性126 673例,女性80 764例,男女性别比为1.57∶1;0岁~和1~4岁年龄组报告病例最多,共计占总报告病例数的72.48%;病例构成比前3位的职业分别是散居儿童(74.88%)、农民(10.75%)和学生(5.75%);全省发病率最高的市依次是宝鸡、延安和安康;发病时间分布呈夏、冬季两个高峰,夏季高峰出现在7~8月,冬季高峰出现在11~12月;病原检测率为4.60%。病原检测结果显示轮状病毒是陕西省其他感染性腹泻的主要病原。结论陕西省其他感染性腹泻的高危人群为5岁以下儿童,特别是秋、冬季的轮状病毒感染;全省的实验室病原检测率较低,传染病监测质量也急需提高。