病毒性肝炎、肝癌与肝移植

原位肝移植已走过42年历程。目前肝移植1年存活率已攀升到88%,手术死亡率已降至0。不伴有肝硬化和能切除的肝细胞癌患者应首选肝切除术;有肝硬化者需行肝移植;晚期肝癌不宜肝移植。手术前、后联合应用乙型肝炎免疫球蛋和拉米夫定,可使患乙型肝炎者接受肝移植的长期疗效与其他肝病受者相媲美。没有肝移植条件的医院不提倡开展肝移植。     

真核表达人乳头瘤病毒16型L_1蛋白在检测宫颈癌患者相应抗体的应用

用真核表达HPV16L1蛋白为抗原，酶联免疫吸附测定64例宫颈癌患者血清和阴道分泌物的相应抗体，并用型特异性聚合酶键反应检测宫颈癌组织HPV16L1基因。结果：宫颈癌组血清HPV16L1抗体阳性年64．1％，对照组20．8％；宫颈癌组阴道分泌物HPV16L1抗体阳性率64.1％，对照组25％；宫颈癌组HPV16L1基因检出率为42．2％，对照组10％。有显著差异（P＜0．01）。结论：高危型HPV感染，宫颈癌患者有明显免疫反应，全身和局部无明显差异，真核表达HPV16L1蛋白可用于宫颈癌患者的抗体测定。     

构建及鉴定携带角蛋白启动子和人乳头瘤病毒16E6/E7基因的重组腺病毒

目的利用AdEasy系统构建携带人角蛋白启动子的人乳头瘤病毒-16(HPV-16)E6/E7基因重组腺病毒,并通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。方法应用PCR方法从含有HPV-16全基因序列的质粒上扩增E6/E7基因,构建pCDNA3.1(-)-K14-E6/E7-polA载体,扩增、酶切获得K14-E6/E7-polA片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack上,构建重组穿梭载体pAdTrack-K14-E6/E7-polA,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-K14-E6/E7-polA,经人胚肾293细胞包装后得到重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。氢化铯(CsCl)梯度离心纯化病毒,提取病毒再感染后的293细胞总RNA,通过RT-PCR方法检测E6/E7基因的表达。结果通过同源重组的方法构建了腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA载体,经酶切和测序鉴定该质粒构建成功。293细胞包装3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,CsCl梯度离心纯化最终获得7.2×1010pfu/mL滴度的重组病毒;用该滴度病毒重新感染293细胞3d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测E6/E7有表达。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6/E7的重组腺病毒pAd-K14-E6/E7-polA。这将为进一步研究HPV-16E6/E7基因功能及利用基因治疗女性宫颈癌奠定了基础。     

小鼠呼吸道合胞病毒感染模型的建立

目的　建立呼吸道合胞病毒 (RSV)感染小鼠模型 ,了解病程规律及病理变化 ,为研制抗RSV药物打下基础。方法　给小鼠感染不同负荷量RSV(10 3、10 4 、10 5、10 6 PFU) ,并于小鼠感染 10 6 PFURSV后不同时间 (1、2、3、4、5、6、7d)取右肺组织作空斑形成实验检测肺组织RSV滴度 ,左肺组织行HE染色、电镜检查及原位杂交检测RSV定位表达。结果　病毒感染量为 10 3PFU时肺组织无空斑形成 ,随着感染病毒量增大 ,肺组织病毒增多。鼠感染 10 6 PFU后 ,随着时间推移 ,肺内病毒量降低 ,感染第 6天的肺组织已无空斑形成。病理显示RSV感染第 3天肺组织炎症性变化最明显 ,感染第 7天肺部炎症细胞减少 ,但出现了部分肺泡壁断裂融合 ,肺泡腔扩大。原位杂交证实RSV主要侵袭支气管、细支气管上皮细胞及肺泡上皮细胞。结论　经鼻内滴入RSV可建立小鼠感染模型 ,可用于抗RSV药物的药效评价     

流式细胞仪检测支原体肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎免疫状态的研究

使用流式细胞位（FCM）双色分析法，对1名支原体肺炎（MP）及1名呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎患性期及恢复期14项淋巴细胞亚群进行了检测，结果显示：急性期两者均有CD4+CD45RO+细胞、CD8+细胞、CD8+CD45RO+细胞、CD56+细胞、CD57+细胞明显降低，CD19+细胞明显升高；恢复期MP上述淋巴细胞亚群均能迅速恢复，而RSV肺炎各项淋巴细胞亚群基本上没有好转，其中CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+CD45RA+细胞、CD4+CD45SRO+细胞、CD8+CD45RO+细胞、CD57+细胞比急性期更低，CD19+细胞比急性期更加升高。提示：RSV肺炎患儿免疫功能受抑制比MP更重，抑制时间持续长，推测这一特点可能正是导致RSV肺炎易反复咳喘的重要原因之一。     

乙型肝炎病毒对T细胞亚群的侵犯及对其功能的影响

以单克隆抗体补作溶解法分离T4、T8细胞亚群，PCR检测65例各型乙肝患者T细胞亚群和PBMCs中的HBVDNA，结合细胞免疫功能改变探讨HBV侵犯免疫细胞对其功能的影响。结果表明：PBMCs中HBVDNA阳性24例（24／65，36．92％），不同类型乙肝患者阳性率差异较大；T4、T8、细胞亚群中HBVDNA阳性分别为16例和21例，HBVDNA阳性组IL2R表达明显降低，抑制细胞功能有不同程度的下降；提示HBV对T8细胞可能更具亲嗜性，HBV对免疫细胞的侵犯是乙肝患者细胞免疫功能紊乱的原因之一。     

骨髓移植患者和献血员巨细胞病毒特异性抗体的检测及其意义

用酶联免疫吸附法检测了5例骨髓移植病人,204名献血员巨细胞病毒特异性抗体IgM和IgA,结果5名接受骨髓移植的病人全部阴性,204名献血员中总抗体检出率29.91％,表明西安地区部分献血员中巨细胞病毒感染率较高,且为近期或活动性感染。这将对骨髓移植构成极大的危险。因此在骨髓移植中应筛选巨细胞病毒抗体阴性的献血员。     

PCR法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA

采用ＰＣＲ法检测了７７例乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶＤＮＡ，２７例阳性，总阳性率为３５．１％。慢性活动性肝炎（９／２１，４２．９％），肝炎后肝硬化（９／１９，４７．４％）及重型肝炎（８／１６，５０．０％）患者ＰＢＭＣＨＢＶＤＮＡ阳性率明显高于慢迁肝（１／１４，７．１％）和急肝（０／７）患者。结果提示ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ的存在在乙肝发病机理中具有一定意义。     

秦巴山区孕妇人巨细胞病毒宫内感染与UL54、UL97基因突变的关系

目的探讨秦巴山区孕妇妊娠期人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染与HCMV UL54、UL97基因突变的关系。方法采用PCR方法检测228对孕妇血清和新生儿脐血血清中的HCMV DNA,对HCMV DNA阳性者采用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子是否发生突变。结果①228例孕妇血清中HCMV DNA阳性者19例,阳性率为8.33%;新生儿脐血血清中HCMV DNA阳性8例,阳性率为3.51%。在19例HCMV DNA阳性孕妇中,其配对脐血阳性7例,HCMV宫内传播率为36.84%。②HCMVDNA阳性孕妇血清及其配对脐血阳性的标本中均未发现HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子发生突变。结论秦巴山区HCMV宫内感染的发生率较高,其发生与HCMV UL54、UL97基因501、594及595密码子突变无相关性,但不排除存在其他位点突变或其他形式基因异常导致病毒致病性改变的可能性。     

人微小病毒B19及硒与大骨节病关系的研究

目的　研究人微小病毒B19(B19)感染和硒与大骨节病的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)及荧光法检测大骨节病病区儿童血清B19DNA和红细胞硒含量 ,并与非病区健康儿童进行对比分析。结果　大骨节病病区儿童血清B19感染率显著高于非病区儿童 ,红细胞硒含量显著低于非病区儿童 ,低硒营养状态的儿童B19感染率明显高于正常硒水平的儿童。结论　我国大骨节病病区存在着B19感染的流行 ,低硒可能是B19感染发生和发展的条件。