全文获取类型
收费全文 | 1334篇 |
免费 | 5篇 |
专业分类
公路运输 | 681篇 |
综合类 | 400篇 |
水路运输 | 110篇 |
铁路运输 | 141篇 |
综合运输 | 7篇 |
出版年
2024年 | 5篇 |
2023年 | 20篇 |
2022年 | 5篇 |
2021年 | 15篇 |
2020年 | 16篇 |
2019年 | 24篇 |
2018年 | 6篇 |
2017年 | 17篇 |
2016年 | 20篇 |
2015年 | 35篇 |
2014年 | 61篇 |
2013年 | 48篇 |
2012年 | 59篇 |
2011年 | 50篇 |
2010年 | 99篇 |
2009年 | 106篇 |
2008年 | 82篇 |
2007年 | 79篇 |
2006年 | 93篇 |
2005年 | 70篇 |
2004年 | 51篇 |
2003年 | 63篇 |
2002年 | 57篇 |
2001年 | 41篇 |
2000年 | 34篇 |
1999年 | 47篇 |
1998年 | 29篇 |
1997年 | 31篇 |
1996年 | 25篇 |
1995年 | 13篇 |
1994年 | 11篇 |
1993年 | 5篇 |
1992年 | 5篇 |
1991年 | 8篇 |
1990年 | 3篇 |
1989年 | 6篇 |
排序方式: 共有1339条查询结果,搜索用时 15 毫秒
991.
人促甲状腺激素受体胞外段的体外重组、蛋白高效表达及其与构象功能的关系 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 TSH受体 (TSHR)是诱发自身免疫性甲状腺病 (autoimmunethyroiddisease ,AITD)的主要自身抗原。TSHR上TSH结合部位、自身抗体及主要的B细胞、T细胞表位均位于其胞外段部分。本研究利用基因重组方法 ,建立人TSH受体胞外段 (hTSHRecd)体外高效表达、纯化系统 ,用于Graves’病的临床及实验研究 ,探索体外表达的重组hTSHRecd蛋白的免疫生物活性与其空间构象的关系。方法 设计 1对hTSHRecd特异性引物 ,自PCRTTM3 hTSHR载体中PCR扩增合成hTSHRecd片段 ,经限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ消化 ,胶回收纯化后 ,重新构建于表达质粒 pQE 30中。用质粒电泳、限制性内切酶消化、PCR 3种方法鉴定重组质粒是否构建正确 ,并于E .coliM15细胞进行诱导表达。所表达的 6×His hTSHRecd融合蛋白经 12 0 g·L-1SDS PAGE ,Westernblotting鉴定。细菌培养产物经超声波破碎、裂解液裂解后利用Ni NTA树脂 ,经金属螯合层析法纯化 ,并经原位再折叠、透析、浓缩等处理。以ELISA、12 5I TSH结合抑制试验检测纯化蛋白与Graves’甲亢患者血清及TSH的结合活性。结果 经鉴定 ,重组质粒中含有以正确方向插入的 12 0 5bp的hTSHRecdcDNA基因片段。hTSHRecd融合蛋白约 4 7kD ,于 12 0 g·L-1SDS PAGE可见深染的特异性蛋白条带 ,可与Graves? 相似文献
992.
袁成福 《西安交通大学学报(医学版)》2007,28(6):612-615
目的构建人MCHR1真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染的HEK293细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HEK293细胞系,用RT-PCR、Western-blot检测MCHR1的表达。结果构建了pcDNA3.1( )/MCHR1真核表达载体,建立了稳定转染的HEK293细胞系,并成功地表达了目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染HEK293细胞系的建立为进一步研究MCHR1的功能奠定了良好的实验基础。 相似文献
993.
采用酵母菌花环法检测了44例肺结核患者红细胞C_3b受体活性及免疫复合物粘附量,并对其中15例进行了C_3b受体对血清免疫粘附抑制因子及促进因子反应的观察。结果表明,肺结核患者C_3b受体花环率及免疫复合物花环率均明显高于正常对照组(P0.05);与正常对照组相比,肺结核患者C_3b受体对正常人血清中的免疫粘附抑制因子的反应性无明显改变(P>0.05),而对免疫粘附促进因子反应性增强(P<0.01)。 相似文献
994.
995.
文章利用Fluent软件对受电弓导流板气动特性进行二维数值研究,计算了不同来流攻角时导流板翼型周围流场的压力分布和速度分布,并得出相应角度下的升力及阻力系数,求出导流板产生的升力及阻力,为受电弓稳定受流的气动补偿控制做出可行性预测。 相似文献
996.
介绍了SS7E型电力机车TGF11型四象限辅助变流器的性能特点,结合现场实际对辅助变流器故障原因进行系统分析,并提出了相应的改进措施和建议. 相似文献
997.
柴胡皂甙d对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响及其作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经内毒素(脂多糖,LPS)诱导,加入不同质量浓度的SSd作用后,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,光学、电子显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡,放免法检测细胞前列腺素E2(PGE2)产生量。结果SSd对肝癌细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。镜下观察,SSd作用组细胞可见典型凋亡小体形成,细胞凋亡率达17.5%。肿瘤细胞前列腺素E2的产生量,SSd作用组明显下降,接近环氧合酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利(Nimesulide)作用组水平。结论SSd可能通过下调COX-2的表达,抑制PGE2产生而发挥抗癌作用。 相似文献
998.
目的 检测中国散发先天性巨结肠症是否有EDNRB基因和EDN 3基因突变 ,以探讨EDNRB及EDN 3与HD发生的关系。方法 34例中国散发先天性巨结肠症。提取手术组织标本基因组DNA ,聚合酶链反应 (PCR)扩增EDNRB基因第 3、4、6外显子和EDN - 3基因第 1、2外显子 ,单链构象多态 (SSCP)分析上述外显子是否有突变。结果 1 3例短段型先天性巨结肠症中 ,2例有EDNRB基因突变 ,1例有EDN 3基因突变。普通型及长段型未见EDNRB基因和EDN 3基因突变。结论 中国散发先天性巨结肠症短段型有EDNRB基因和EDN 3基因突变 ,提示EDNRB基因、EDN 3基因与先天性巨结肠症的发生有关 相似文献
999.
大鼠心房、心室M受体密度的增龄性变化 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 观察成年大鼠心房肌和心室肌M受体密度的增龄性变化。方法 运用放射性配基受体结合法测定不同月龄(2~30个月)大鼠心房肌和心室肌M受体与其强阻断剂氚标记二苯羟乙酸奎宁酯(3H QNB)的最大结合力(Bmax,可转化成密度值RT)及解离常数(Kd)值。结果 ①随着年龄的增长,SD大鼠心房肌M受体密度逐渐减少:从(259±9)pmol/g 蛋白下降至(174±13)pmol/g蛋白,且24个月以后的老龄鼠心房肌M受体密度减少更快。②M受体在各年龄段大鼠心室肌分布密度基本相当。③Kd值在各个年龄段大鼠心房和心室无明显差异。结论 M受体在大鼠心房的分布密度随着年龄的增长而减少,而在心室的分布密度与年龄的增长没有显著相关性,亲和活性在各个年龄段大鼠心房和心室差异不明显。 相似文献
1000.