雄激素受体突变体T877A的促细胞增殖效应

目的　评价雄激素受体突变体 (mtAR)对细胞生长的促进作用。方法　我们利用三种重组腺病毒即野生型雄激素受体 (Ad wtAR)、一个被广泛研究的前列腺癌 (CaP)相关的mtAR(Ad mtAR ,T877A)、以及作为对照的腺病毒载体 ,评价并比较了野生型AR及mtAR的促细胞生长效应。结果　相对于被野生型或者对照的腺病毒转染的LNCaP、PC3细胞 ,转染mtAR的LNCaP、PC3细胞无论有无合成的雄激素 (R1881)存在的情况下均显示出更强的细胞增殖作用。并且用重组T877A腺病毒转染的LNCaP和PC3细胞显示了对R1881更强的反应性。结论　这些发现提出了崭新的关于mtAR在CaP细胞中作用的细胞生物学方面的见解 ,并且表明mtAR(T877A)可能为前列腺癌病程的进展提供了选择性的细胞生长的效应。     

人U_6启动子表达载体的构建及在胃癌细胞中的活性鉴定

目的构建人U6(hU6)snRNA启动子驱动的小RNA分子的表达载体,并在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞中鉴定其表达外源性小RNA分子的活性。方法以人基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hU6snRNA启动子序列,并将其克隆入PUC19载体中,命名为PUC-hU6-extra,经测序证明其序列的正确性;用脂质体法转染SGC-7901细胞;用RT-PCR检测U6启动子的转录活性,并测定培养细胞的生长曲线。结果hU6snRNA基因启动子和紧接转录起始点hU6snRNA的前27个核苷酸被成功地克隆入PUC19质粒载体,重组载体在SGC-7901细胞中能高表达小分子RNA,并且未观察到后者对细胞体外增殖的影响。结论成功构建了以hU6snRNA启动子驱动的、能在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞内高效转录小分子RNA的表达质粒PUC-hU6-extra。     

针刺对正常动物IL_2—IFN—NKC免疫调节网的影响

针刺对机体白细胞介素_2-干扰素-自然杀伤细胞(IL_2-IFN-NKC)免疫调节网影响的研究,国内外尚未见报道。为了进一步从免疫学角度阐明针刺防治疾病的机理,我们进行了针刺对正常动物IL_2-IFN-NKC免疫调节网影响的实验。结果表明:针刺能够提高正常小鼠IL_2、NKC活性。针刺不仅具有促进接种NDV小鼠产生干扰素的能力,而且能够直接诱导正常小鼠产生干扰素。说明针刺对IL_2-IFN-NKC免疫调节网具有正向调节作用。     

Construction and characterization of hGM-CSF-expressing K-562 cell line

Objective The whole process of vaccine preparation is time-consuming and technically challenging. Here the hGM-CSF-engineered K-562 cell line was constructed to simplify tumor vaccine preparation process. Methods The eukaryocyte expressing plasmid pcDNA3. 1/GM-CSF was first constructed and its accuracy was verified through sequencing. The pcDNA3. 1/GM-CSF was transfected into COS-7 cells to verify GM-CSF expression and cytokine activity using TF-1 cell line. Then the plasmid was transfected into K-562 cell line using liposome method, and was selected under G-418 and sub-cloned by limiting dilution. GM-CSF product from the monoclone GM-CSF-K-562 cell lines was quantified using ELISA method. Results We successfully constructed the hGM-CSF eukaryocyte expressing plasmid and hGM-CSF expressing K-562 cell line. Conclusion The construction of K-562/GM-CSF line will simplify the preparation of tumor vaccine, thus facilitating the application of tumor vaccination therapy in clinical application.     

细胞周期素E与甲状腺肿瘤的关系

目的　检测甲状腺肿瘤组织中CyclinE和PCNA的表达 ,探讨CyclinE与肿瘤发生及恶性程度的关系。方法　利用免疫组织化学技术分析 17例甲状腺腺瘤、43例甲状腺癌及 19例瘤旁“正常”组织中的CyclinE及PCNA的表达。结果　CyclinE及PCNA在“正常”组织与甲状腺腺瘤组织中表达无显著性差异 ;CyclinE及PCNA在甲状腺癌中的表达显著高于“正常”组织和甲状腺腺瘤组织 ,且随肿瘤恶性程度的增加而增加 ;CyclinE和PCNA的表达在“正常”组织、甲状腺腺瘤和甲状腺癌组织中均呈正相关。结论　CyclinE的表达可以作为诊断甲状腺癌及预测肿瘤恶性程度的指标。     

Identification of differentially expressed genes in two new human bladder carcinoma cell lines

Objective To screen and identify differentially expressed genes in two new human urothelial carcinoma cell lines, BLS-211 and BLX. Methods Suppression subtractive hybridization （SSH） was used to createa subtracted library, and clones were sequenced. Results Totally 13 over-expressed genes in BLX and 9 in BLS-211 cells were obtained, respectively. Among them, 18 were known genes and 4 were new ESTs （Expressed Sequence Tag）, and were collected by GenBank dbEST database （The access number was EB390424-7）. Conclusion SSH is a powerful method for the identification of differentially expressed genes. The differential expression of some BCG-associated genes in different ceils may be related to the different responses to clinical BCG therapy. The identified new ESTs can be cloned for full length to further study their functions.     

西安地区12年间胃镜检出上消化道癌症分析

目的探讨西安地区内镜检出并经病理证实的上消化道癌症的临床流行病学特点。方法选择1991年1月至2002年12月于西安市三所大型医院进行胃镜检查并经病理确诊的上消化道癌症患者,对其临床、病理、内镜及流行病学特征进行分析。结果12年来上消化道癌症总检出率为8.13%,其中食管癌检出率3.42%,贲门癌检出率1.44%,非贲门部胃癌检出率3.26%,十二指肠癌检出率0.01%。12年来食管癌和胃癌的检出率虽有一些波动,但呈明显下降趋势(P=0.000),贲门癌呈现出较为平缓的上升趋势(P=0.000)。贲门癌的男女性别比为6.29∶1,远较胃癌和食管癌为高(2.92∶1和3.09∶1,P=0.000)。食管鳞癌和腺癌构成无明显变化(P=0.562),食管腺癌没有明显的升高趋势(P=0.557)。结论西安地区食管癌居上消化道癌症之首;12年来胃癌、食管癌的检出率明显下降,贲门癌的检出率呈明显升高趋势;贲门癌为不同于食管癌和胃癌的独立疾病。     

血管紧张素Ⅱ对心肌梗塞后心肌细胞核酸、蛋白质合成影响的研究

通过分离、培养心肌梗塞后成年大鼠的心肌细胞（MC），观察了血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在不同处理因素对照下，对MC核酸、蛋白质合成的影响。结果显示：在相同浓度的AngⅡ（10－7M）作用下，MI组MC的RNA和蛋白质的合成速率均显著高于假手术组（P＜0．05）。AngⅡ的上述作用，可分别被AT1受体阻滞剂Losartan、特异性AngⅡ拮抗剂[1，3]AngⅡ和血管紧张素抗肽（Amg－AP）完全阻断。结果提示：AngⅡ可直接作用于非梗塞区心肌的MC，促进MC的RNA、蛋白质合成；介导AngⅡ对MC的作用是AT1受体。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养方法,检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率。方法应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs,贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达,然后用pEGFP-N3与Lipofectamine 2000不同浓度比例转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率。结果①原代MSCs多呈纺锤形或梭形,有聚集生长的倾向,多3~5个细胞成为一个集落。传代后,细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样,长梭形,胞浆突起较少,胞体轮廓不甚清晰,胞体也相对较大;②GFP转染后24 h即可见绿色荧光蛋白表达,72 h表达最强,此后逐渐减弱,到4周时仍可见少量表达;③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关,1∶2到1∶3最高。结论利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;GFP转染是一种较好的MSCs标记方法。     

质子交换膜燃料电池水管理研究

水管理是质子交换膜燃料电池（PEMFC）可靠运行的关键，既维持适当的膜的水合程度，又不致水淹电极，是水管理的理想状况．燃料电池作为一个多相、多尺度、多物理场、动态复杂系统，其中的流动、传热、传质、相变、多相流和电化学过程相互影响、相互联系、相互制约．就PEMFC内流体流动，物质的传输，热量生成和传递，水的相变及两相流，电化学反应等方面综述了目前的研究进展，权衡利弊，以期达到最佳的燃料电池电化学性能．