结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测

目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表...     

Bcl-2和Bax对梗阻性黄疸大鼠肾小管上皮细胞凋亡的调节作用

目的探讨Bcl-2、Bax蛋白在梗阻性黄疸大鼠肾小管的表达及其与肾小管上皮细胞凋亡的关系。方法60只SD大鼠,随机分为对照组(20只)和梗阻性黄疸组(40只)。结扎胆总管建立梗阻性黄疸模型,对照组仅剖腹游离胆总管。两组大鼠分别于术后第1、2、3、4周处死,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的变化;观察肾脏病理组织学及超微结构改变;TUNEL法观察肾小管细胞凋亡;免疫组化Elivision二步法检测梗阻性黄疸大鼠肾组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果随着梗阻性黄疸时间的延长,血清BUN和Cr逐渐升高;肾小管凋亡细胞增多。梗阻性黄疸组与对照组的Bcl-2、Bax蛋白表达相比,有显著统计学差异(P<0.01)。经Spearman s相关性分析,肾小管细胞Bax蛋白表达与肾小管细胞凋亡呈正相关,而Bcl-2蛋白表达则与细胞凋亡呈负相关。结论梗阻性黄疸可以引起大鼠肾脏损害,肾小管细胞凋亡在梗阻性黄疸大鼠肾功能损害中发挥作用;Bcl-2、Bax蛋白对梗阻性黄疸大鼠肾小管上皮细胞凋亡有调节作用。     

秦巴山区婴幼儿维生素A、铁蛋白、骨钙素水平及营养状况调查

目的研究秦巴山区婴幼儿维生素A、钙、铁营养状况以及体格生长和喂养情况。方法采用分层多级整群抽样方法对该区3县10乡425名0~3岁婴幼儿进行体格检查和膳食结构调查;对144名儿童进行了血清铁蛋白、骨钙素、生长激素和血红蛋白的测定,123名儿童进行了血清VitA的测定。结果婴幼儿血清铁蛋白、骨钙素、生长激素、VitA和血红蛋白异常率分别为32.3%、28.6%、36.8%、31.6%和25.6%;生长迟缓、低体重及消瘦的平均患病率分别为19.8%、24.3%和7.6%。结论婴幼儿维生素A、钙及铁缺乏与家庭经济状况,乳母营养状况及不良饮食结构和习惯有关。     

硒对饲克山病病区粮大鼠肝线粒体~3H—亮氨酸参入的影响

本文采用同位素活体参入的方法,观察了饲克山病病区粮组和加硒粮组大鼠肝~3H—亮氨酸参入比放射性的变化,同时测定了肝硒含量,谷胱甘肽过氧化物酶活性和TBA值。发现病区组大鼠肝线粒体参入率,谷胱甘肽过氧化物酶活性和肝硒含量明显降低,而TBA值却显著升高。此改变提示,病区组大鼠肝抗过氧化能力低下,脂质过氧化物及其代谢产物堆积,导致线粒体蛋白质合成障碍,这可能是内环境缺硒时动物组织细胞呼吸酶活性降低,能量代谢障碍的重要原因之一。     

急性淋巴细胞白血病的免疫学分型

本文用抗全T细胞单克隆抗体,抗普通淋巴母细胞抗原(CALLA)单克隆抗体,抗HLA-DR非多态性抗原决定簇单克隆抗体,辅以SmIg检测及Es花环形成试验,将急性淋巴细胞白血病分为4种免疫学型别T-ALL,B-ALL,C-ALL和N-ALL。19例急性淋巴细胞白血病分型结果以C-ALL属多,T-ALL及N-ALL次之,B-ALL少见。T-ALL多见于男孩。     

尿NMP22筛检复发性膀胱癌临床意义的研究

目的　探讨尿NMP2 2预测膀胱癌术后患者肿瘤复发的临床意义。方法　膀胱癌术后患者 5 0例 ,留晨尿检测NMP2 2水平 81人次。所有病例均行膀胱镜检查 ,并对可疑病变处取膀胱组织送病检。尿NMP2 2浓度采用双抗体酶标免疫分析法测定。结果　膀胱癌复发 19例 ,未复发 31例 ,两者尿NMP2 2中位数的 95 %可信区间分别为 13.9～ 5 0 .3U·mL- 1 和 4 .6～ 7.6U·mL- 1 ,无重叠。初次膀胱镜检和 或病理检查无肿瘤复发 36例 ,尿NMP2 2测值异常 (NMP2 2≥ 14 .0U·mL- 1 )和正常 (NMP2 2 <14 .0U·mL- 1 )者分别为 11例和 2 5例。经随诊前者膀胱癌复发 5例 (45 .5 % ) ,后者为 0 (0 2 5 ) ,两者复发百分比有显著性差异 ,相对危险性 (RR)为 12 5 0。结论　尿NMP2 2可作为膀胱癌术后预测肿瘤复发的指标 ,与膀胱镜相比 ,其具有可早期预测、简单、方便等优点。     

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达

目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH3T3荧光表达细胞的数量来确定病毒的浓度;使用RV载体感染SK-N-SH细胞,通过流式细胞学荧光检测明确RV在SK-N-SH细胞的感染效率。结果成功构建了基因转移载体RV/EGFP,确定重组病毒的浓度为8.3×106病毒颗粒/mL。在SK-N-SH细胞RV/EGFP稳定转染并有效表达。在SK-N-SH细胞EGFP的荧光表达显示RV的转移并且表达的效率达到30%以上。结论SK-N-SH细胞能被RV病毒载体有效感染,在转基因细胞株外源基因的表达长期稳定并且显示RV病毒载体具有良好的基因转移效率。     

STUDIES ON BLOOD GLUTATHIONE PEROXIDASE PROTEIN LEVEL OF CHILDREN IN KESHAN DISEASE AND KASHIN-BECK DISEASE AREAS

Ｋｅｓｈａｎｄｉｓｅａｓｅ (ＫＤ) ,ａｎｅｎｄｅｍｉｃｃａｒｄｉｏｍｙｏ ｐａｔｈｙ ,ａｎｄＫａｓｈｉｎ Ｂｅｃｋｄｉｓｅａｓｅ (ＫＢＤ) ,ａｎｅｎｄｅｍｉｃｄｅｆｏｒｍａｔｉｖｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ ,ａｒｅｔｗｏｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈｕｎｋｎｏｗｎｃａｕｓｅ .ＰｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｌｏｏｄＳｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄＧＳＨ Ｐｘａｃ ｔｉｖｉｔｙｏｆｒｅｓｉｄｅｎｔｓｉｎｔｈｅｅｎｄｅｍｉｃａｒｅａｓｏｆｂｏｔｈｄｉｓ…     

人杀菌渗透增强性蛋白N末端片段在大肠杆菌中的表达

目的构建表达人杀菌渗透增强性蛋白(BPI)N-端193个氨基酸的重组表达质粒,诱导表达BPI193重组蛋白。方法应用RT-PCR的方法从HL-60细胞内扩增出BPI氨基端1-193个氨基酸的基因序列,克隆入T载体。将BPI193基因片段定向克隆入原核表达载体PET-28a中,构建重组的原核表达质粒PET-BPI193,转化大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导表达蛋白。应用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,计算机薄层扫描分析蛋白占菌体总蛋白百分比;Western-blot技术检测表达蛋白的特异性。结果从HL-60细胞中扩增得到579bp的BPI193基因片段,构建了T-BPI193亚克隆和PET-BPI193重组表达质粒。转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导,经SDS-PAGE检测表明,成功表达了6His-BPI193融合蛋白。计算机薄层扫描分析表达量占菌体总蛋白的12%。Western-blot检测显示表达产物具有特异性。结论成功构建了PET-BPI193重组表达质粒。在大肠杆菌BL21内,诱导获得了BPI193与组氨酸融合表达的重组蛋白。     

凋亡阳性率及凋亡相关基因bcl-2、bax在宫颈癌放疗前后表达的意义

目的　观察 30例宫颈癌患者放疗前后的凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达的变化 ,以探讨放射治疗肿瘤的机理。方法　采用免疫组织化学方法和脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术TUNNEL标记法对 30例Ⅰ -Ⅲ期宫颈鳞癌患者的放疗前后凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达水平进行检测。结果　 30例患者凋亡阳性率放疗前后的表达分别为 76 .7%和 10 0 % ,放疗后显著增高 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 73.3%和 4 6 .7% ,放疗后显著降低 (P <0 .0 5 ) ;bax蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 86 %和 10 0 % ,放疗后显著增加 (P <0 .0 5 )。结论　放疗的过程就是放射线诱导细胞调亡的过程 ,放射线通过抑制bcl 2蛋白的表达、增强bax蛋白的表达诱发肿瘤细胞的凋亡