THE PROTECTIVE EFFECTS OF THE TOTAL SAPONIN OF DIPSACUS ASPEROIDES ON THE APOPTOSIS OF HIPPOCAMPAL NEURONS INDUCED BY β-AMYLOID PROTEIN

Objective To investigate the effects of the total saponin of Dipsacus asperoides (tSDA) and ginsenoside Rb1 (GRb1) on the apoptosis of primary cultured hippocampal neurons induced by β-amyloid protein (Aβ). Methods Primary cultured hippocampal neurons, the cultures were pretreated with tSDA and GRb1 on 10d for 24 hours respectively. Then the cultures were treated with 35μmol·L-1 Aβ25-35 for 24 hours, observed the changing of survival rate of neurons and the apoptosis of neurons with biochemical analysis combining immunofluorescent cytochemical double-staining technique. Results Hippocampal neurons were treated with 35μmol*L-1 Aβ for 24 hours, and survival rate of neurons downed to 52.6%. When neurons were pretreated by tSDA and GRb1, survival rate of neurons increased 11% to 15%. The findings of immunofluorescent cytochemical double-staining indicated that apoptotic neurons were obviously more than that of the blank group, reaching 43.9%.When neurons were pretreated by tSDA and GRb1, apoptotic neurons were downed to 16.6%, 10.8% respectively. Conclusion tSDA had the same effects as GRb1, protecting the neurons, antagonizing neurotoxicity of Aβ, increasing survival rate of neurons, and reducing apoptotic neurons induced by Aβ.     

人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达

目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。     

甲基莲心碱抑制K562/A02细胞GST-π的表达

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响。方法应用MTT法测定甲基莲心碱处理的K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的影响。RT-PCR法分析Nef处理后,GST-πmRNA转录的变化。通过Western Blot观察Nef对GST-π蛋白表达的影响。结果甲基莲心碱对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用。用Nef处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1天、第3天和第5天分别为9.6%、41.4%和10.7%;GST-πmRNA转录水平在用药后第3天下调最大,为(50.7±2.3)%。GST-π蛋白的表达于用药后第1天、第3天和第5天分别下降25.57%、48.42%和10.68%。结论甲基莲心碱具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能包括下调K562/A02细胞GST-πmRNA的转录和蛋白的表达。     

新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤时大脑皮质NSE和GFAP的变化

目的　了解新生鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时大脑皮质神经元特异性烯醇化酶 (NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的变化。方法　 7日龄SD鼠经右侧颈总动脉结扎加缺氧处理建立HIBD动物模型。用免疫组织化学法检测对照组和HIBD组新生鼠大脑皮质NSE、GFAP的含量。结果　①HIBD后 2 4h损伤部位大脑皮质NSE含量显著降低 ,7d后有所升高但仍低于正常对照组。②正常情况下GFAP在新生鼠大脑皮质中的表达局限而稀少 ,HIBD后 2 4h损伤部位大脑皮质的GFAP表达无明显变化 ,HIBD后 7dGFAP表达明显增加 ,广泛分布于损伤部位的大脑皮质中。结论　①新生鼠HIBD早期大脑皮质NSE含量即明显降低 ,提示NSE可作为判断神经元损伤的特异性指标之一 ;②新生鼠HIBD恢复期 ,脑损伤部位的GFAP明显增加 ,提示其可能参与了损伤区的修复。     

去甲斑蝥素在体外对白血病细胞核酸和蛋白质合成的影响

应用细胞培养、放射性核素示踪技术研究了去甲斑蝥素对白血病细胞的作用。结果表明，去甲斑蝥素对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞株ＤＮＡ和蛋白质合成有抑制作用，对ＲＮＡ合成未见明显影响；对正常人骨髓细胞ＤＮＡ合成无抑制相反有一定促进作用。     

血脂康对高脂血症患者C反应蛋白的影响

目的　研究血脂康对高脂血症患者C反应蛋白 (CRP)的影响。方法　测定 45例高脂血症患者应用血脂康治疗前后血脂、CRP水平的变化。结果　经过 8周血脂康治疗 ,总胆固醇、LDL C、TG及CRP分别下降2 8.13 % (P <0 .0 1)、2 1.92 % (P <0 .0 1)、13 .3 7% (P <0 .0 5 )及 13 .75 % (P <0 .0 5 ) ,而HDL C升高 9.2 5 %(P >0 .0 5 )。结论　血脂康不仅可调脂 ,也可以降低CRP水平     

自体淋巴细胞免疫重建对白血病瘤苗的加强作用

目的观察在免疫重建过程中应用白血病瘤苗对DBA/2小鼠的一般状况、抵御L1210细胞攻击以及小鼠保护性免疫功能的影响。方法用同系小鼠脾脏淋巴细胞对照射后的免疫缺陷鼠进行免疫重建,同时用灭活的L1210细胞皮下注射免疫DBA/2小鼠,7d后用L1210细胞皮下攻击小鼠,观察小鼠的一般状况、成瘤率、瘤块生长情况。通过ELISA法测定外周血IFN-γ含量,以评估细胞免疫作用的强弱;通过病理切片了解瘤块中心坏死区及周围浸润细胞情况。结果与对照组相比,免疫重建+瘤苗可以有效提高单纯应用瘤苗所产生的保护性免疫功能,IFN-γ含量明显升高;用L1210细胞攻击,成瘤小鼠瘤块生长缓慢,瘤周单个核细胞浸润明显,瘤块内部肿瘤细胞坏死明显,生存期大大延长。结论在免疫重建的同时应用瘤苗,可以大大加强瘤苗的保护性免疫作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养方法,检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率。方法应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs,贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达,然后用pEGFP-N3与Lipofectamine 2000不同浓度比例转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率。结果①原代MSCs多呈纺锤形或梭形,有聚集生长的倾向,多3~5个细胞成为一个集落。传代后,细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样,长梭形,胞浆突起较少,胞体轮廓不甚清晰,胞体也相对较大;②GFP转染后24 h即可见绿色荧光蛋白表达,72 h表达最强,此后逐渐减弱,到4周时仍可见少量表达;③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关,1∶2到1∶3最高。结论利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;GFP转染是一种较好的MSCs标记方法。     

芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统PI3K/Akt和Erk1/2的影响

目的观察中药芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积、细胞凋亡和细胞信号转导系统中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和芪丹通脉片预处理组。生理盐水或芪丹通脉片灌胃7 d后,大鼠麻醉开胸,结扎冠状动脉前降支40 min,再灌注4 h。伊文氏兰和TTC染色测定心肌梗死范围,计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值(%,IS/AAR);TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数;Westernblot测定信号蛋白的表达。结果芪丹通脉片组的心肌梗死范围明显小于模型组[(28.8±8.4)%vs.(49.1±10.3)%,P<0.01];其心肌细胞凋亡指数亦显著低于模型组[(11.6±2.3)%vs.(20.3±4.5)%,P<0.01];而其Akt和Erk1/2的磷酸化表达水平增加,与模型组比较分别增加了2.5倍和1.9倍(P<0.01,P<0.05)。结论芪丹通脉片能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,并影响生存信号通路PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。     

Retrovirus-mediated transfer of the fusion gene encoding EGFP-BMP2 in mesenchymal stem cells

Bone marrow mesenchymal stemcells(MSCs)are pluripotential stemcells that have the capacitytodifferentiate into chondrocytes and osteoblasts[1].Ithas been well documented that bone morphogeneticproteins(BMPs),a group of proteins belonging tothe TGF-βsuperfamily,can induce bone for mationbothin vivoandin vitroas well as promote osteo-blastic differentiation of MSC[2].HeterologousBMP2is successfully transferred to MSCs and genetherapy is employed based on repairing bony andcartilage defec…