Preparation of recombinant firefly luciferase by a simple and rapid expression and purification method and its application in bacterial detection

A simple and rapid expression and purification method of recombinant firefly luciferase was developed for bacteria detection. A modified luciferase gene from North American firefly Photinus pyralis was cloned into pET28a expression vector and the recombinant protein was produced in Escherichia coli BL21. The recombinant luciferase, equipped with a polyhistidine affinity tag, was purified by immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC). The approach generated an abundant expression and an efficient purification of a recombinant luciferase with final yield 1.995mg/L of cell culture. Experiments on the recombinant luciferase also showed that the relative light units (RUL) of the enzyme were 5.8×108, and the specific activity was 2.9×1010 RLU/mg. By applying adenosine triphosphate (ATP) bioluminescence to detection of the coin bacteria using the recombinant protein, the ATP content of bacteria was 9.48×10-16mol/mL, and was identical to the bacteria counts (4500CFU/mL) in order of magnitude. Taken together, our results provided a simple and efficacious method of the preparation of recombinant luciferase, which could be applied in the determination of bacteria via ATP bioluminescence.     

THE QUANTITATIVE MEASUREMENT OF BCL-2, P53 PROTEIN AND PCNA EXPRESSION IN BREAST CARCINOMA AND THEIR CORRELATION WITH PROGNOSIS

Recently,alargenumberofresearchesindicatedthatoccurenceanddevelopmentofbreastcarcinomaswerecorrelatedwithhighexpressionofblockingapoptosisoncogene,mutationofantioncogeneandexpressionofcontrollingcellproliferativeoncogene.Therewerefewreportsondocumentsofquantitativestudyofexpressionaboutblockingapoptosisoncogene--hcf--2(Bcellleukaemia/lymphomagene),productofP53proteinandproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)inbreastcarcinoma.Ourpurposewastoinvestigatequantitativeindexinrelationtoclinicalpathol…     

表面活性氧在排气净化催化剂中作用机制的研究

针对发动机的发展趋势,结合当前机动车尾气催化剂的研究进展,对催化剂中的表面活性氧种的种类以及它们的催化活性进行了讨论;同时对表面氧种的产生、脱附、存储、迁移以及相互关系进行了归纳。此外,对它们在催化反应中的行为和作用机制的研究状况进行了综述,并提出了研究中存在的问题以及建议。     

含增生结节鼠肝谷胱甘肽转硫酶的纯化和性质研究

含增生结节鼠肝GST活性在纯化过程各步均较正常肝明显增高,经DEAE-52和CM-52柱层析分离得阴离子同工酶A-1和A-2以及阳离子同工酶C-1,C-2,C-3和C-4,用等电聚焦电泳测定等电点分别为6.7,6.3,7.4,7.9,8.3和8.6。SDS-PAGE结果显示,含增生结节肝GST在正常大鼠肝GSTYa,Yb和Yc区带相应的位置,出现3条区带,各亚基分子量分别为26,000,27,000和28,600道尔顿,但活性增高明显的C-3和C-4只出现1条相当于Yc亚基的区带。含增生结节肝GST6种同工酶的带电性质及亚基组成与正常肝无明显差别。阳离子同工酶C-3和C-4活性占上柱总活性的70%,说明含增生结节肝GST活性增高以阳离子同工酶为主。     

基于最大频繁序列的蛋白质分类算法

针对现有基于频繁模式的分类算法未考虑完全频繁模式所产生的大量无效序列,提出了一种基于最大频繁序列的蛋白质分类算法,此算法每一类都以独有的最大频繁模式作为代表,执行模式裁减和测试数据分类。实验表明该算法在继承传统算法优点的同时提高了结果的精确度,降低了模式的冗余度,此应用增加了分类的生物信息学意义。     

HBV Pre S1蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能

为探讨应用双杂交体系统克隆与HBVPreS1蛋白质结合的肝细胞受体的可行性，我们构建了HBVPreS1蛋白质与酵母GAL4DNAbindingdomain融合蛋白质酵母表达质粒。通过应用该质粒转化酵母菌株SFY526，检测报道基因产物五半乳糖苷酶活性，结果表明HBVPreS1蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能。能否去除PreS1蛋白质转录激活功能区域但却保留其与肝细胞受体的结合区域用于酵母双杂交体系统筛选肝细胞cDNA文库、克隆与PreS1蛋白质结合的肝细胞受体尚需进一步实验探讨。     

P_(53)蛋白和增殖细胞核抗原在肾癌中表达的临床意义

采用免疫组织化学方法检测40例肾癌组织中P53蛋白和增殖细胞核抗原（PC-NA）的表达。发现P53蛋白阳性表达者共10例（25％）。P53蛋白表达与肿瘤病理分级、临床分期及预后无相关性。肾癌组织的PCNA增殖指数随肿瘤病理分级的上升而增加，PC－NA高表达组（增殖指数＞10％）预后不良，特别是临床早期但PCNA高表达者预后也很差。结果提示P53蛋白表达在肾癌生物学行为及预后评估中无重要意义，而PCNA可作为肾癌恶性度及预后评估指标。P53蛋白和PCNA表达无相关性。     

中化泉州码头大直径灌注桩施工质量控制技术

中化泉州码头采用直径为2.2 m和2.6 m的灌注桩作为基桩,由于大直径灌注桩在水运工程中比较少见,其清渣、混凝土浇筑等施工中的质量控制比较复杂,在施工前期产生了桩底盆形沉渣和桩间夹渣的异常情况。通过现场分析,清孔后泥浆中含砂率的大小直接影响着沉渣厚度。总结水运工程中常规灌注桩施工质量控制技术,提出更严格标准以满足大直径灌注桩施工质量要求。在施工中采用气举反循环并结合泥浆净化装置进行清渣,与传统正循环清孔相比,其质量和效率得到了显著改善。该套设备可使泥浆中的含砂率由常规要求的4%~6%有效降低至2%以下有效,灌注桩桩身完整性得到了进一步保证,施工质量很好地满足了规范要求。     

密闭空间空气净化用滤材检测设备设计研究

随着机动车辆的普及,人们呆在密闭空间即驾乘室以及室内的时间会逐渐拉长,如何有效的控制密闭空间的PM2.5浓度值值得我们去探讨和研究。通过对密闭空间空气净化原理的分析,采用激光粒子计数方法,设计了密闭空间空气净化检验流程及相配套的检测设备,将密闭空间(含室内及驾乘室)大气中的PM2.5含量控制在标准要求的浓度值以内。     

126例涎腺肿瘤的免疫组织化学研究

利用S-100蛋白抗体对126例涎腺肿瘤（多形性腺瘤、恶性多形性腺瘤、粘液表皮样癌、腺样囊性癌、基底细胞腺瘤和乳头状囊腺瘤等）进行了免疫组化研究。结果发现:5种肿瘤中都有瘤细胞或部分瘤细胞表达S-100蛋白;但乳头状囊腺瘤的肿瘤性上皮则呈S-100蛋白阴性反应。提示:S-100蛋白抗原在涎腺肿瘤性肌上皮细胞中均有表达。