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261.
262.
酵母双杂交系统筛选HBV PreS1相互作用蛋白 总被引:2,自引:2,他引:0
目的利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制。方法以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵质粒pSos-PreS1,将其转化cdc25酵母感受态细胞,提取酵母蛋白质进行Western blot分析,证实其在酵母细胞中的表达;将pSos-PreS1分别与pMyr Lamin C、pMyr SB共转化酵母,证实诱饵蛋白无自激活作用。将pSos-PreS1与人肝cDNA文库共转化cdc25酵母感受态细胞,通过营养及温度选择性培养筛选阳性菌落,扩增阳性菌落目的基因并测序。结果成功构建了HBV PreS1基因酵母双杂交诱饵载体pSos-PreS1,筛选得到5个准阳性克隆,序列分析表明其分别与人类钾通道调制因子1(KCMF1)、细胞色素C、VitD结合蛋白、人源去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)和人白蛋白具有高度同源性。结论利用SRS筛选出5个可能与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解HBV侵入肝细胞的机制奠定了基础。 相似文献
263.
目的对作者发现的一个中国3代人心脏传导阻滞家系SCN5A基因新突变L1001Q,构建突变表达载体,利用分子生物学方法和全细胞膜片钳技术观察L1001Q突变的功能。方法一步定点诱变法构建pEGFP-L1001Q-SCN5A突变体;激光共聚焦和Western blotting技术检测突变蛋白定位和表达;全细胞膜片钳技术观察突变体钠电流。结果野生型和L1001Q突变均表达在细胞膜上,且表达量无明显变化。二者最大激活电流分别为(148.34±0.77)pA/pF和(132.59±0.96)pA/pF(P>0.05),L1001Q突变半失活电压V1/2为(-73.25±0.87)mV,较野生型正向转移约3.5mV[V1/2为(-76.71±0.73)mV,P<0.05],L1001Q突变失活后恢复时间常数较野生型稍减小,差异无统计学意义(WT tau=16.8ms,L1001Qtau=14.1ms,P>0.05)。结论 L1001Q突变未影响钠通道蛋白的表达和转运,主要通过改变钠通道门控特性引起钠通道功能减弱进而导致心脏传导阻滞。 相似文献
264.
声像档案的管理与利用刍议 总被引:1,自引:0,他引:1
随着社会的进步和科技的普及,在各类活动中形成了大量的声像档案,声像档案是对我们工作过程的记录和对外宣传的重要依据。如何加强声像档案的管理,已成为学校教育教学管理中的重要工作。比如在学校教学科研过程中,许多研究课题的每一个进展阶段都要真实地记载下来,除了文字载体以外,还非常需要声像档案这种特殊的载体形式。而在展示学校全体师生精神风貌、工作及学习生活、先进事迹及党政工团所开展的各项工作和活动中,利用声像档案材料能够真实形象地宣传学校校园文化建设内涵,从而向社会展示学校的良好形象。 相似文献
265.
266.
为市民群众创造安全、便捷、舒适、和谐的出行环境,是公交行业一切工作的出发点和落脚点,也是公交创先争优活动的主题和根本任务.蚌埠公交集团立足企业实际,将创先争优活动与全市开展的"微笑伴你同行,温馨洒满车厢,创市民满意公交"活动有机结合,以深入推行苗苗服务规范,弘扬苗苗精神,打造行业服务品牌为载体,营造创先争优氛围,引起轰动性品牌效应. 相似文献
267.
Objective To construct lentivirus vectors carrying alphastatin gene, test its secretion expression in human umbilical vein endothelia cells (HUVECs) and observe its effects on growth, migration and tube formation of HUVECs. Methods We constructed recombinant lentivirus vectors of NT4-alphastatin fusion gene containing neurotrophin-4 signal peptide, pro-region sequences and alphastatin, then transfected the recombinant lentivirus vectors into HUVECs to obtain secretory protein alphastatin and test its anti-angiogenic activities in vitro. Results Our data showed that recombinant self-inactivating lentivirus vectors of NT4-alphastatin were successfully constructed, and stable NT4-alphastatin transduced HUVECs were capable of sustainably secreting alphastatin which significantly suppressed HUVECs migration and differentiation but not VEGF-induced proliferation. Conclusion This report represents the first time on the use of lentivirus-based vectors to deliver alphastatin, the endogenous angiogenesis inhibitor, and reveals the potential utility of anti-angiogenic gene therapy with lentivirus vectors for treating cancer. 相似文献
268.
目的 构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能.方法 以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS1后回收与酵母表达载体pSos连接,对重组质粒进行序列测定后命名为pSos-preS1,经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a),提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析.结果 成功构建了HBV preS1基因的酵母表达载体,Western免疫印迹分析显示HBV preS1基因在酵母细胞中正确表达.结论 pSos-preS1的构建为通过SOS招募系统(sos-recruitment system, SRS)筛选与HBV preS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBV preS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础. 相似文献
269.
大城市中央商务区是城市核心高端服务职能的空间载体,是人流、物流、信息流交换互动的聚集区,其土地的高密度开发决定了交通需求的高度集中。如何规划和协同CBD的交通资源,以应对各层次的交通流、提高CBD的交通服务水平,是决定CBD发展成败的关键,也是国内外先进城市持续探索的课题。珠江新城核心区是广州CBD的重要组成部分,用地面积1.05平方公里,总建筑面积464万平方米, 相似文献
270.
针对传统数值仿真计算方法耗时长、占用计算机资源多等缺点,提出基于LightGBM算法的拖曳系统动力响应进行评估的回归预测模型,以已有的OrcaFlex数值模拟得到的数据为样本,以拖曳系统上的海洋环境条件、拖船航速和下放缆长为特征,以动力响应为目标,引入LightGBM算法,对拖曳缆顶端张力最大值等动力响应进行预测分析。与传统数值模拟方法相比,LightGBM算法在保证结果准确性的同时大幅度提高了计算效率。通过与随机森林(RF)、极限梯度提升(XGBoost)算法相比,其准确度和计算效率的表现更好。最后提出了贝叶斯参数优化的LightGBM算法,准确度进一步提高,为提前采取措施保障拖曳系统的作业安全提供了一条高效的技术途径,同时为建立拖曳系统数字孪生体提供了有力的技术支撑。 相似文献