MicroRNA-338-3p真核表达载体的构建及其对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的构建microR-338-3p(miR-338-3p)过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响。方法以pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.Coli Top10后,经过DNA测序、BLAST检测及验证;将构建成功的载体瞬时转染入SGC-7901细胞系中,应用Real-time PCR检测miR-338-3p的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖的改变。结果测序验证成功构建了miR-338-3p的真核表达载体;瞬时转染SGC-7901细胞后miR-338-3p表达水平有显著增加,能够抑制SGC-7901细胞的体外增殖。结论成功构建了miR-338-3p的真核表达载体,获得了瞬时表达miR-338-3p的人胃癌SGC-7901细胞系,初步证实miR-338-3p过表达可抑制肿瘤细胞的增殖。     

高职高专航海类专业学生口语交际能力的提高策略

分析高职高专航海类专业学生英语口语会话课程的教学现状和不足,结合建构主义理论、形成性评估评价体系以及注重情感因素在教学中积极作用等方面的理论,对加强学生口语交际能力的方法和策略提出建议。     

安全长级智慧护航海格快乐校车KLQ6606X

近日，海格客车收到了来自河南省唐河县儿童福利学校的感谢信。孩子们用真挚的情感表达了对芒果V基金和湖南卫视天声一队捐赠“海格快乐校车”的感激之情。他们用真切的感受描述了“海格快乐校车”带给他们学习生活的变化。用稚嫩的笔触画出了“海格快乐校车”——KLQ6606X带给他们的快乐和欣喜。     

一种基于光谱增强的遥感影像地面特征表达评价方法

遥感影像(真彩色)平面图制作国家标准对于影像质量和颜色的规定不甚明确。实际工作中在面对海量影像数据的光谱增强时,不同种影像数据或者同种数据经过不同方法的地面特征解译之后很难进行镶嵌,不同项目的底图成果也不尽统一,成果在短时间内无法达到让人满意的效果。因此,找到一个相对统一和稳定的方法来评定影像底图,是大幅度缩短真彩色影像底图生产周期的关键。     

英语口语表达的得体性浅析

得体性既是英语口语交际的方向,又是英语口语交际的标尺.能否成功地用英语进行人际交流在很大程度上取决于说话者在表达过程中所使用语言的得体性.得体的口语表达能够促进交流,帮助建立良好的人际关系.     

野生型p27和核定位信号缺失型p27真核表达载体的构建及表达

目的 构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法 提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p27全长和非NLS区片段的PCR扩增,获得p27WT全长(CDKN1B,NM＿004064.5)和p27△NLS编码区序列,分别将其克隆至真核表达载体pCMV-Blank,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染HEK293T细胞,48 h时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白,Western blotting检测p27在细胞质和细胞核中的蛋白表达。结果测序结果显示,真核表达载体pCMV-Blank中插入的p27WT序列和p27△NLS序列均与NM＿004064.5序列相一致。pCMV-p27WT转染HEK293T细胞后,细胞总p27蛋白表达显著增加,核浆分离检测发现其在细胞质和细胞核中均表达;而pCMV-p27△NLS转染HEK293T细胞的总p27蛋白表达也显著增加,核浆分离检测发现其主要在细胞质中表达。结论 成功构建人p27...     

放射诱导p16基因胰腺癌靶向性表达的研究

目的　构建 pcDNA3.1 Egr.1p-p16重组质粒并检测其在人胰腺癌 JF305细胞中的辐射诱导表达。方法　将人p16 cDNA基因连接到有辐射诱导特性的早期反应因子 Egr.1p的下游,构建成 pcDNA3.1 -Egr.1p- p16 重组质粒,利用脂质体介导转染人胰腺癌细胞系 JF305 细胞;采用 RT- PCR方法和 Western blot方法检测不同剂量 X射线照射后,被转染细胞中 p16 的转录和表达水平。结果　酶切鉴定证实 pcDNA3. 1 Egr. 1p -p16 重组质粒构建正确。被pcDNA3.1 Egr.1p -p16重组质粒转染的人胰腺癌 JF305细胞经不同剂量 X射线照射后,p16 基因表达均高于未照射组。结论　X射线可诱导 pcDNA3.1 -Egr.1p -p16重组质粒在人胰腺癌 JF305细胞中表达增强。     

Eukaryotic expression and biological activity analysis of neuroprotective peptide [Gly14]-Humanin

Objective To investigate the expression of neuroprotective peptide [Gly14]-Humanin (HNG) in eukaryotic cells by gene engineering technique and analyze its biological activity. Methods By means of asymmetrical primer/template, double stranded cDNA of HNG with FLAG in its C-terminal was obtained, which was cloned into the plasmid pcDNA3.1(-), and the resultant recombinant vector pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG was transfected into PC12 cells. At the same time, the recombinant vector pcDNA3.1(-)/EGFP was transfected to control the efficiency of transfection. The expression of HNG in the cells was determined by immunocytochemistry. In order to analyze the biological activity of the expressed HNG, 25μM Aβ25-35 peptide was added to the culture medium of the transfected cells for 24h, then cell morphology, MTT assay and Hoechst 33258 staining were observed. Results The eukaryotic expression vector of pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG was identified by enzyme digestion and sequencing. HNG was highly expressed in PC12 cells. After exposure of PC12 cells to 25μM Aβ25-35 for 24h, cell viability decreased to (65.8±5.3)%, and the dystrophic changes of neuritis and nuclei condensation were obvious. When cells were pre-transfected with pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG, Aβ25-35-induced cell death and morphological changes of cells and nuclei were suppressed. In contrast, pre-transfected with empty vector did not protect cells from Aβ25-35-induced toxicity. Conclusion The eukaryotic expression vector for FLAG-tagged HNG was successfully constructed and expressed in PC12 cells. Expressed HNG has biological activity.     

就业导向的高职商务英语专业口语课程体系研究

随着我国第三产业的精进,服务领域呈现国际化、标准化、个性化等特征。用人单位对毕业生英语口语的要求日趋严格,这对于高职商务英语专业既是挑战也是机遇。教学工作者唯有审时度势、务实创新,才能培养出适应社会市场需求、推动行业健康发展、改变地区经济面貌的人才。本文分析当前高职英语专业就业形势,揭示在校生能力现状,论述商务英语专业口语课程体系改革设计方案及其保障机制,旨在探究提高学生就业质量的方法。     

法律框架下网络表达自由的合理规范

表达自由作为我国公民的一项最基本的权利,伴随着网络的发展而需要给予其新的诠释.网络表达自由作为表达自由的一个重要内容,是包含的关系.但在实践中,这种网络表达自由又与表达自由有相当大的区别,因此正确认识网络表达自由的具体内涵成为当务之急.本文主要通过对网络表达自由的概念以及特点进行论述,从而引出法律关于网络表达自由的限制原则,最后提出完善措施.