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《西安交通大学学报(医学版)》2019,(3):399-405
目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。 相似文献
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在地基承载力低、地下水位高的务件下,采用中继间法顶进小角度斜交框架桥,由于桥体受力复杂,易产生偏转和扎头,方向和高程控制极为困难.介绍中继间法顶进小角度斜交框架桥质量控制措施. 相似文献
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房学先 《铁道标准设计通讯》1997,(8):14-16
结合顶进式框架桥修建实例及其刃角和尾墙等构造设施的功能,提出框架桥构造长度与保证行车安全、压缩慢行时间有一定关联,并对框架桥各组成部分构造长度的确定提出具体建议,供设计和施工参考。 相似文献
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大型铁路框架桥顶进施工技术 总被引:2,自引:0,他引:2
结合北京市南中轴路大型铁路框架桥顶进施工,重点介绍了大体积混凝土浇筑方案选择、顶进顶力分析及顶进过程中的方向纠偏控制方法. 相似文献
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系统阐述了总图规划体现新的设计理念的几个方面,同时对研究总图规划的主要因素、总体设计思路的形成以及总图方案的比选与推荐方案的确定也作了详尽的分析和介绍。 相似文献
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海河共同沟盾构井基坑深28.4m,所处地层十分复杂,施工难度大,基坑支护要求高。介绍一种较新的设计方法,即先施作完成部分主体结构的环框梁,以该环框梁代替钢支撑,并作为永久结构的一部分。这样既增加了施工空间,又降低了工程造价。对于单元槽段接头的选择本文也进行了初步的探讨。 相似文献
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13A型钩尾框的研制及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
分析了原13号钩尾框裂纹及断裂的原因,阐述了13A型钩尾框的设计原则和方案,介绍了13A型钩尾框的结构强度及试验验证情况,同时提出了批量生产及检修过程中的质量控制要点。 相似文献
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