hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达

目的构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据。方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的片段和真核表达载体pEGFPN3,再用T4DNA连接酶将含有目的基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆、提取质粒进行鉴定。将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平。重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况。结果获得目的基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA。重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础。H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高。结论成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列。     

基于物联网的中铁快运物流效益评价指标体系

在对比新旧流程的基础上,从利益相关者的视角出发,用价值链分析理论初步构建指标体系.在问卷调查的基础上,依据问卷调查的数据,用SPSS中的因子分析对指标进行筛选,最终构建了以物流企业、铁路局、顾客、社会影响为准则,38个二级指标的效益评价体系,从而为全面评价和测度中铁快运应用物联网后的物流效益奠定基础.     

基于CBE的高职物流管理专业人才培养模式研究

新教学理念下CBE教育理念越来越受到高职院校的重视。本文首先对高职物流专业应用型人才培养现状进行分析,进而基于CBE教育理念提出了高职物流专业应用型人才培养模式的构建路径,以期优化高职物流专业教学质量,提升物流专业人才培养水平。     

基于工学结合的高职模具专业实践教学体系构建

模具行业对技术人员的素质和能力要求越来越高,借鉴外国的先进经验,推进工学结合,改革模具专业实践教学体系,构建科学合理的高职模具专业实践教学体系势在必行。     

高校危机管理预案体系构建研究

当今世界无时无刻都会面临各种危机事件,危机管理已经成为全球公共管理者关注的重要课题。今天的高校已不再是世外桃源,各种危机事件就发生在我们身边,极易发生各种影响学校正常运转、给学校声誉带来严重负面影响的突发事件。本文认为,通过危机管理预案体系的构建、危机管理理论的科学运用以及学校师生的群策群力,学校是完全可以把危机事件爆发的可能性或危机事件产生的危害性降至最低限度,从而尽可能地维护好高校安全稳定的大局。     

2型腺伴随病毒基因治疗载体的构建

目的　构建一种适用于中枢神经系统疾病的基因治疗载体。方法　以野生型 2型腺伴随病毒 (AAV 2 )质粒pssv9int 及逆转录病毒载体质粒plxsn为基本元件 ,利用重组DNA技术 ,构建了一种通用型AAV载体质粒pssHG Neo。结果　该质粒除含有必备的原核细胞复制子及Ampr 筛选基因外 ,还含有真核细胞筛选基因———Neor 及供插入目的基因的多克隆位点 (MCS) ,在MCS的上游为逆转录病毒的长末端重复序列 (5’LTR) ,具有启动子的功能 ,启动定向插入到MCS的外源目的基因。质粒中的AAV反向末端重复序列 (ITR)具有定点整合于人基因组 1 9号染色体S1位点的特点。结论　AAV载体是具有广阔前景的基因治疗载体     

无充气腋窝入路腔镜甲状腺手术空间构建的常见问题及解决思路

目的 通过总结归纳外科医师在前期学习无充气腋窝入路腔镜甲状腺手术空间构建过程中的常见错误及解决思路,为后来的学习者提供参考,提高手术操作的规范化,缩短学习曲线,减少手术并发症。方法 回顾性分析了2022年1月至2023年6月间在浙江省人民医院头颈外科行无充气腋窝入路腔镜技术患者共计210人,其中由初学组医师建腔150人,由熟练组医师建腔60人。评价了两组之间锁骨上皮神经损伤、肩胛舌骨肌损伤或离断等9项常见建腔过程中的错误发生情况,并比较了两组之间的差异。结果 两组患者的年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置和病理类型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。初学组医师建腔过程中在锁骨上皮神经损伤(19.33%vs. 3.33%)、肩胛舌骨肌损伤或离断(16.00%vs. 0)、颈前带状肌游离过度(24.00%vs. 3.33%)、胸大肌及锁骨上筋膜损伤(16.00%vs. 5.00%)、颈外静脉及属支损伤(8.00%vs. 0)、胸锁关节过度游离(7.33%vs. 0)、胸锁乳突肌肌间隙进入错误(8.67%vs. 0)等问题的发生率上显著高于熟练组医师(P<0.05)。初学组与熟练组...     

铁路工务安全状态预警决策支持系统构建研究

构建以"工务安全"为主题的预警决策支持系统是目前铁路安全管理发展的一个趋势,总结广深铁路工务安全状态预警决策支持系统建设经验,基于"以监测数据客观反映生产安全,以风险分析和安全评价方法指导安全管理,实现铁路工务安全状态预警决策支持目标"建设思想,通过基于数据仓库的工务安全信息集成、决策报表分析、数据挖掘分析和专家知识库预警等技术,提出构建铁路工务安全状态预警决策支持系统新方法.     

英、汉谚语韵律构建对比

汉、英谚语除了其深刻的内涵共性外,皆具优美和谐的韵律美感．不同语言的语音系统各不相同．对比研究英、汉两种语言的韵律特色,可以使读者更好地掌握,学习和赏析英语语言,密切语言之间的内在含接．     

人脑源性神经营养因子基因克隆及序列分析

目的　克隆人脑源性神经营养因子 (hBDNF)基因并进行序列分析。方法　提取健康成人末梢血白细胞基因组DNA作为模板 ,应用PCR技术和T 载体克隆法克隆hBDNF基因 ,筛选阳性克隆、酶切鉴定 ,并进行序列测定和分析。结果　DNA序列测定的结果与GenBank提供的已知序列 (M6 1 1 81 )比较 ,所克隆的hBDNF基因从起始密码子ATG到终止密码子TAG全长共744bp ,序列完全相同。结论　自人基因组DNA中克隆hBDNF基因 ,为进一步开展阿尔茨海默病 (AD)的基因治疗积累了资料。