人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建

目的　为了研究人神经生长因子 (hNGF)基因导入急性脊髓损伤 (SCI)模型的治疗作用 ,构建并产生重组腺伴随病毒 (AAV)载体。方法　将hNGF外源性核酸片段插入AAV shuffer质粒 pSSHG Neo的KpnⅠ BamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒 pFG14 0代替野生型腺病毒 ,包装质粒 pAAV/Ad及已构建的pSSHG Neo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎 2 93细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果　成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF ,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分 ,梯度稀释测得滴度为 1.4 6× 10 12 PFU·mL-1。结论　成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒 (rAAV/hNGF)载体 ,为SCI基因治疗实验奠定了基础。     

大黄素、黄芪多糖在体外对乙型肝炎病毒的抑制作用

目的体外观察大黄素、黄芪多糖单用与联合应用抗HBV的作用。方法以HepG2.2.15细胞为研究模型,选用干扰素α、拉米夫定为阳性对照药物,观察培养液中加入不同浓度大黄素、黄芪多糖及两药联合应用抗HBV作用的效果。采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。结果大黄素的3个剂量组(12.5、25.05、0.0 mg/L)和所观察的时间点(3、69、d)对HBV DNA、HBsAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。大黄素对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为21 mg/L,对HepG2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为40.66 mg/L,治疗指数为1.94。同时发现黄芪多糖各剂量组对HBV无明显的抑制作用(P>0.05)。大黄素、黄芪多糖联合应用在疗效方面无明显的交互作用(P>0.05)。结论大黄素在体外对HBV具有一定的抑制作用,黄芪多糖无明显抑制HBV的作用,两药联用无明显协同抗HBV的作用。     

UL2基因与HSV-1在三叉神经节中潜伏感染的相关性

目的　深入了解UL2基因与HSV 1在三叉神经节潜伏感染的相关性。方法　选择HSV 1国际参考标准株F株、HSV 1RE(株 ) (UL2基因插入突变株 )和其亲代HSV 1△ 30 5株 (TK- )三株病毒进行对比分析研究。对三株HSV 1病毒腹腔免疫接种小鼠双侧三叉神经节分别进行PCR扩增。结果　HSV 1 (RE)和HSV 1 (△ 30 5)组HSV 1潜伏感染率明显低于HSV 1 (F)组 (P <0 0 2 5) ,提示UL2基因可能在HSV 1形成潜伏感染过程中起一定作用。经HSV 1 (F)病毒攻击实验后三个实验组小鼠 ,其潜伏感染率无明显变化 ,而对照组小鼠潜伏感染率明显高于HSV 1 (RE)组和HSV 1 (△ 30 5)组 (P <0 0 1 )。结论　HSV 1 (RE)株的免疫接种可以预防HSV 1潜伏感染的建立。同时也为HSV 1RE株作为神经系统疾病基因治疗载体提供了理论依据     

一种基于保护卡的ARP特定协议数据滤除方法

局域网特别是大型计算机房中ARP欺骗的现象非常普遍,严重的影响了网络用户的使用效果,在高校的计算机房中对实践教学也构成了极大地威胁。针对这种现象,文章在噢易Free卡的基础上,提出了一种对ARP特定协议数据包的滤除方法,可以有效的防止局域网中的ARP欺骗。     

2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察

用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖苷酶表达产物，同时对细胞作形态学观察。结果显示野生型AAV－2感染宿主细胞后24～48h，多数细胞胞体收缩、变形，部分细胞死亡、脱落，用Cap基因探针从病变的293细胞基因组DNA中检测到了野生AAVDNA；而被重组AAV感染的293细胞表达了β-半乳糖苷酶，而未出现细胞病变，本结果提示野生型AAV对敏感宿主细胞可表现出毒性作用，其原因可能与rep产物的作用有关。     

潜在型克山病患者柯萨奇B组病毒抗体和红细胞免疫功能的检测

探讨潜在型克山病患者柯萨奇 B组病毒 ( Coxsackie virus B,CVB)感染情况和红细胞免疫功能变化。方法　采用间接酶联免疫吸附法 ( ELISA)对陕西省黄陵县克山病病区潜在型克山病患者 CVB1～ 6Ig M,CVB1～ 6Ig G以及红细胞免疫功能进行检测。结果　 1潜在型克山病组血清 CVB1～ 6Ig M抗体阳性率明显高于非病区健康对照组 ,但明显低于病毒性心肌炎组。2潜在型克山病组血清 CVB1～ 6Ig G抗体阳性率明显高于非病区健康对照组 ,但与病毒性心肌炎组无明显差异。 3潜在型克山病组红细胞 C3 b R花环率明显低于非病区健康对照组 ,血清红细胞免疫粘附抑制率则明显升高 ,而血清红细胞免疫粘附促进率两组之间无明显差异。结论　潜在型克山病患者有 CVB感染存在及红细胞免疫功能低下     

计算机病毒武器：“网络中心战”的常规武器

随着美国海军“网络中心战”的提出,计算机病毒武器的研究与应用已成为各国军方关注的重大课题。本文首先讨论了计算机病毒武器的特点,然后分析了计算机病毒武器的现状和攻击样式,最后探讨了计算机病毒武器的发展趋势。     

计算机病毒的发展趋势及对策

首先对计算机病毒的特点和现状做简要介绍,然后分析了计算机病毒的发展趋势,最后提出一些防范计算机病毒的对策.     

Methylation status of the interferon-gamma gene promoter in chronic hepatitis B

Objective To evaluate the methylation status at CpG site -55 in the interferon-gamma (IFN-7) gene promoter and its effect on IFN-7 expression in chronic hepatitis B. Method The authors recruited 30 patients with UBeAg-positive chronic hepatitis B (CHB), 30 HBeAg-negative CHB patients, and 30 healthy blood donors. Pyrosequeneing was used to determine the methylation status at CpG site -55 in the IFN-γ gene promoter following bisulfite treatment of DNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The expression of IFN-γ was analyzed by real-time RT-PCR and ELISA. HBV DNA in PBMCs was detected by nested PCR. Results The methylation level at CpG site -55 in the IFN-γ gene promoter was significantly increased, resulting in subsequent down-regulation of the expression of this cytoldne in CHB. The methylation level at CpG site -55 was significantly higher in HBeAg-positive patients than in HBeAg-negative ones (P<0.01) and was also significantly higher in PBMCs from HBV DNA-positive patients than from HBV DNA-negative ones (P<0.01) ; the methylation level at CpG site -55 was positively correlated with the amount of HBV DNA in serum (P<0.01). Oonclusion IFN-γ gene expression appears to be regulated by methylation of the IFN-γ gene promoter in CHB; the methylation level at CpG site -55 is associated with HBV infection.     

乙型肝炎病毒全X基因对HEK293细胞功能的影响

目的克隆并构建乙型肝炎病毒(HBV)全X基因表达载体,探讨HBV全X基因对HEK293细胞功能的影响,并比较HBV全X基因与X基因对细胞影响的差异。方法应用基因克隆的方法从慢性HBV感染者血清中获得HBV全X及X基因,构建带有HBV全X基因与X基因的真核表达载体以及带有绿色荧光基团GFP的重组质粒;细胞转染技术将其分别转入HEK293细胞,RT-PCR及Western-blot技术验证HBV全X基因及X基因在细胞内的表达;荧光显微镜下观察其在细胞内的定位情况;MTT法检测细胞增殖率的变化;Annexin V流式细胞分析技术检测其对细胞凋亡率的影响;TRAP实时荧光定量PCR法检测各组细胞端粒酶活性的变化。结果成功构建带有HBV全X基因的重组质粒且目的基因能在HEK293细胞内高表达;表达的HBV全X蛋白主要分布在胞核,而X蛋白在胞质、胞核均有分布;转染HBV全X和X基因后细胞增殖率分别为(0.826±0.002)%和(0.805±0.013)%,显著高于转染空质粒(0.691±0.035)%和未转染对照组(0.681±0.018)%,差异具有统计学意义(P<0.05);转染HBV全X和X基因后细胞凋亡率分别为(25.25±3.02)%及(21.34±2.16)%,显著高于转染空质粒(13.49±1.49)%及未转染细胞对照组(11.37±1.58)%,差异具有统计学意义(P<0.05);转染全X及X基因细胞的端粒酶活性亦显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);全X转染组细胞的增殖率、凋亡率及端粒酶活性均高于X转染组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HBV全X基因具有促细胞增殖、凋亡以及影响细胞端粒酶活性的作用,其可能通过不同于HBV X基因的细胞内途径影响细胞的生物学功能,从而在HBV相关的原发性肝细胞癌发生发展中起作用。