介导p73去阻抑肽表达的重组腺伴病毒的构建和鉴定

目的构建编码融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT的重组腺伴病毒表达载体,为恶性肿瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法采用互补引物二次PCR法以及T载体克隆法获得p53(N37)基因克隆,酶切后将其连同穿膜肽HA2-TAT片段一起连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT亚克隆至腺伴病毒的穿梭质粒pSSHG-CMV中,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并进行酶切鉴定;应用磷酸钙沉淀法,pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT、辅助质粒pAAV-Ad,腺病毒全基因组质粒pFG140三种质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并用斑点杂交法测定重组病毒的滴度;MTT比色法、流式细胞仪观察重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT对HepG2细胞的抑制作用。结果克隆出p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的(2×1013pfu/L)重组腺伴病毒表达载体并对HepG2细胞有明显的抑制作用,且这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的。结论通过分子克隆体外重组技术成功制备了rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT复制缺陷型重组腺伴病毒,为下一步开展在p53突变或缺失肿瘤中针对p73的靶向性肿瘤基因治疗研究奠定了基础。     

接入交换机在局域网安全上的应用

文章阐述了接入层交换机的安全保障机制,并从防止蠕虫病毒扩散、网络广播风暴控制、防dhcp server欺骗攻击、ARP欺骗防护等四个方面介绍了安全控制策略的配置方法,以期减少局域网的安全隐患,提高网络的运行效率。     

基于动力学的蓝牙网络病毒研究

随着蓝牙技术在诸多领域的应用和普及,蓝牙网络的安全问题日益突显.运用动力学模型对蓝牙网络的病毒传播进行定性讨论,建立能反映病毒传播的数学模型.通过分析影响病毒传播的关键因素,寻求预防和控制病毒传播的策略,为防止病毒传播提供一定的理论依据.仿真实验表明:通过对关键因素的预防和控制,能够较好地防止病毒传播.     

网络嗅探的防范与检测

本文对网络嗅探技术进行了讨论,分析了嗅探程序的危害,研究了各种地址欺骗攻击方式,为维护网络安全,提出了相应的防止办法。     

小儿HBVM与肾脏疾病

对２５５例肾脏病及５０例非肾脏病患儿分别进行ＨＢＶＭ的检测。结果显示２５５例肾脏病患儿有７１例ＨＢＶＭ阳性，阳性率为２７．８％，与对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。ＨＢＶＭ阳性率在肾炎性肾病中最高，其次是肾病综合征和原发性血尿。     

浅析子网掩码在Intranet中灵活应用

本文简单介绍了在Intranet中子网掩码的几种应用，并分别做了简单的分析。     

重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用

目的　探讨重组腺伴随病毒载体表达人脑源性神经营养因子 (hBDNF)对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用。方法　用 β淀粉样肽 (Aβ2 5 3 5)注入大鼠Meynert核损伤胆碱能神经元。损伤后 8～ 10d行hBDNF重组腺伴随病毒脑内注射。经避暗回避试验测试大鼠学习记忆能力 ,组织学及免疫组织化学观察hBDNF表达以及胆碱能神经元数量变化。结果　避暗回避试验结果显示 ,应用hBDNF重组腺伴随病毒 4周后 ,实验组动物的学习记忆能力增强 ,行为明显改善。胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组织化学染色显示 ,注射点附近免疫反应阳性神经元散在或成群分布 ,数目明显增多 ,经与模型组比较 ,胆碱能神经元数量增高约 3 7%。结论　hBDNF重组腺伴随病毒可在脑内表达hBDNF ,表达的hBDNF对损伤的胆碱能神经元具有营养和保护作用。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察

目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测用 pLy D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果　经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗 pLy D的构建 ;实验小鼠产生了对HSV 1特异性的抗体 (抗体滴度 :ELISA法 1∶2 0 3,中和试验法 1∶37) ,并经受了HSV 1病毒的攻击 (存活率 :70 % )。结论　成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy D ,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应 ,并具有良好的保护作用。     

单纯疱疹病毒性角膜炎土贝母皂甙点眼的浓度筛选与刺激性评价

目的　通过动物试验评价土贝母皂甙 (tubeimoside ,Tu)治疗单纯疱疹病毒性角膜炎 (herpessimplexkeratitis ,HSK)的效果及点眼刺激性 ,并确定其点眼浓度值。方法　根据药物的眼刺激性选用 5、2、0 .8、8× 10 -2 、8× 10 -3、8× 10 -4 g·L-1Tu点眼 ,确定 0 .4、0 .2、0 .1g·L-1评价药物疗效。在地鼠肾细胞BHK 2 1上进行单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV 1型 )SM4 4毒株复苏 ,制作兔HSK模型。采用裂隙灯显微镜、扫描电镜和透射电镜观察眼部病变的动态变化评价Tu疗效。结果　 5、2 g·L-1Tu有中度刺激性 ,0 .8g·L-1Tu有轻度刺激性。 8× 10 -2 、8× 10 -3、8× 10 -4 g·L-13组Tu无任何眼刺激性。 0 .4g·L-1Tu有轻度刺激性 ,0 .1、0 .2 g·L-1Tu无刺激性。 0 .4、0 .2、0 .1g·L-13组Tu均具有一定疗效。结论　Tu点眼剂的浓度与刺激性呈正相关 ,点眼刺激性从轻度到无的界值浓度为 0 .4、0 .2、0 .1g·L-1。治疗实验性HSK有一定的疗效 ,但尚不及无环鸟苷     

APPLICATION OF DIGOXIGENIN LABELED PROBES TO DETECTION AND TYPING OF HERPES SIMPLEX VIRUS

ＣｈｕＹｏｎｇｌｉｅ（楚雍烈）；ＬｉｕＱｉａｏｆａｎｇ（刘巧芳）；ＬｉｕＺｈｅｎｇｆｅｎｇ（刘正风）；ＤｕＹｉｈｕａ（杜忆华）；ＬｉｕＹａｎｎａ（刘延娜）ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＤＩＧＯＸＩＧＥＮＩＮＬＡＢＥＬＥＤＰＲＯＢＥＳＴＯＤＥＴＥＣＴＩＯＮ...