基于CRISPR对大肠埃希菌O157∶H7的检测

目的基于成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR),建立对大肠埃希菌O157∶H7的新型检测方法。方法应用PCR扩增实验室保存的443株肠道细菌(310株非O157∶H7大肠埃希菌、35株大肠埃希菌O157∶H7、89株志贺菌和9株沙门菌)的CRISPR1和CRISPR2,并将PCR产物测序;提取CRISPR database数据库中(标准法)100株肠道细菌(47株非O157∶H7大肠埃希菌、5株大肠埃希菌O157∶H7、9株志贺菌和39株沙门菌)的CRISPR1和CRISPR2序列。使用CRISPR Finder在线软件分析PCR产物测序序列和CRISPR database数据库的CRISPR序列。Clustal X软件进行间隔序列比对。比较标准法和PCR扩增CRISPR两种方法检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性。结果共分析543株肠道细菌,其中75.6%的非O157∶H7大肠埃希菌、75.5%志贺菌、91.7%沙门菌和95%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR1,其间隔序列数目为3~26、2~9、2~32、3。57.1%的非O157∶H7大肠埃希菌、77.6%志贺菌、85.4%沙门菌和100%O157∶H7大肠埃希菌含有CRISPR2,其间隔序列数目为1~20、1~6、2~27、1或4个。95%的O157∶H7大肠埃希菌的CRISPR1和90%CRISPR2分别含有3条独特间隔序列(S1-1,S1-2,S1-3)和1条独特间隔序列(S2-1)。间隔序列比对结果显示,S1-1+S1-2+S1-3和S2-1检测O157∶H7大肠埃希菌的特异性分别是100%和99.6%。标准法检测和PCR扩增CRISPR1和CRISPR2检测大肠埃希菌O157∶H7的一致性分别达99.6%和99.3%。基于CRISPR检测大肠埃希菌O157∶H7在模拟样品中的应用,结果显示在原样品大肠埃希菌O157∶H7浓度约2.3CFU/mL时,经12h增菌后即能检测出来。大肠埃希菌O157∶H7聚类分析显示,40株O157∶H7大肠埃希菌可分为3类。结论基于CRISPR的大肠埃希菌O157∶H7的检测方法,可以作为监测大肠埃希菌O157∶H7感染和高毒株大肠埃希菌O157∶H7有价值的流行病学工具。     

纯正四驱，20年不变! 铃木维特拉历史

1988年～2008年,连续20年,铃木维特拉坚定不移地恪守了纯正四驱的原则。这是怎样一个跨世纪的追求呢?铃木维特拉(Sukuki Vitara)在日本被称作"Escudo"。与不少日系车一样,维特拉并没有使用全球一致的名字。但在本质上,它始终未变,坚定不移地恪守了纯正四驱的原则。从1988年,铃木揭开紧凑型SUV的序幕开始,直到2008年,超级维特拉被中国SUV迷们追捧,一个跨世纪的历史见证了维特拉的成功。     

福特车常见维修技巧

<正>1福特福克斯车1.1电子节气门的维护由于大多数车主买车主要是代步,因而车辆长时间在市区低速、短行程及走走停停的行驶,导致电子节气门非常容易脏。电子节气门脏污后轻则导致油耗增加,重则直接导致发动机不易起动。因此,电子节气门的清洁维护非常重要。     

体验丰田插电式混合动力汽车

我非常荣幸有机会实际体验丰田汽车公司的普锐斯插电式混合动力轿车，包括所渭的“短版”和“长版”两种。短版的，纯电动续驶里程20公里，长版的，则为30公里。由于在我的停车位已经装了一个220V、16A的交流充电桩，充电很方便。     

故障实例＆检修

故障现象：一辆钱江QJ125T-3B型踏板车，因油耗高更换了缸体、活塞组件、传动皮带、磁电机定子线圈、化油器等配件。更换后，油耗仍在5．5L／100km以上。     

浆砌块石扶壁式驳岸的简化计算

运用T形砌体短柱偏心受压计算方法,对浆砌块石扶壁式驳岸肋板与底板连接处的承载能力进行了验算,设计并建设了大丰市金属回收公司码头驳岸.使用情况表明,该设计方法安全可行.     

泥质板岩对下坝隧道施工的影响及对策

安全保障是隧道施工的首要条件.文中通过对下坝隧道所处区域泥质板岩对隧道施工的不良影响及特征的分析,针对不同施工段、不同围岩类型等提出了预防性施工措施,为下坝隧道的顺利贯通及营运打下坚实的基础.     

定子冲片基于NX三维模型的参数化程序设计

利用NX软件相应工具编写图形对话框,建立基于表达式的定子冲片模型,并存储为模板文件。最终实现冲片的参数化交互式程序设计。     

电路故障检查经验和窍门

摩托车电气系统的故障,分为"硬"故障和"软"故障。所谓硬故障,如灯泡灯丝烧断、电子点火器损坏、(电子元件二极管、可控硅击穿,电容器漏电)、磁电机定子线圈严重短路,等电器损坏故障,如图1所示。软故障,如点火开关、照明开关连接导线断路、供用电电路搭铁短路、导线插接件、灯泡与灯座、转向开关、变光开关触点之间接触不良等。通过修理和调整等措施,能使电气系统恢复正常状态。