葎草花粉cDNA表达文库的构建和初步鉴定

目的构建葎草花粉cDNA表达文库,为进一步筛选葎草花粉的主要致敏蛋白组分、制备重组变应原奠定基础。方法采集新鲜葎草花粉,过筛后液氮保存,利用Trizol法抽提葎草花粉总RNA,纯化后PCR法反转录合成cDNA。经SfiⅠ酶切,过凝胶柱层析,去除小于400 bp的片断,收集大于400 bp的cDNA片段,加工后与λTripIEx2连接,文库体外包装,取出一小部分感染宿主菌XL1-Blue MRF,检测文库容量;PCR分析插入的cDNA片段的大小及多样性。结果成功构建一个含有5×105重组子的葎草花粉表达文库,重组率为90%,平均插入片段长度约为1.02 kb。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选克隆的目的cDNA。     

西安地区气传昆虫的调查

在西安市的市区及郊区分设气传昆虫捕捉点 ,利用诱捕、扫捕、吸捕等方法捕捉了西安地区气传昆虫 ,为时 1年。结果发现西安地区 4～ 11月均有气传昆虫污染 ,5、6、7月份污染最重。全年共捕捉气传昆虫 110 79只 ,属 11目、79科。气传优势昆虫为蚜、蚜茧蜂、隐翅甲科 ,大型气传优势鳞翅目昆虫为天蛾科及夜蛾科 ,它们大多属气传病媒昆虫 ,与当地一些传染病的流行 ,支气管哮喘的发作有关。     

西安市过敏性哮喘变应原谱的分析

目的调查西安市过敏性哮喘的常见变应原,为本地区变态反应性疾病的防治提供依据。方法采用14种吸入和7种食入常见变应原的标准提取液对2005年1月～2011年6月就诊我科的857例过敏性哮喘患者进行皮肤点刺试验,并比较不同性别和不同年龄段变应原阳性率的差异。结果吸入变应原阳性率依次为粉尘螨、屋尘螨、艾蒿、法桐、霉菌、藜草、葎草、禾本科等,食入组变应原以虾、螃蟹、牛奶、鸡蛋为主;不同性别变应原阳性情况无显著差异,仅有杨树不同(P<0.05);<20岁人群变应原阳性率较高,尤其是粉尘螨、多价羽毛与其余年龄段阳性率差异较大(P<0.05)。结论粉尘螨、屋尘螨、艾蒿、法桐、霉菌、藜草、葎草等为西安市最主要的变应原,不同性别之间变应原无显著差异;不同年龄段之间青少年变应原阳性率较高。     

法国梧桐花粉的部分纯化及其主要变应原免疫活性分析

目的　对法国梧桐花粉变应原进行部分纯化并对其主要变应原免疫活性进行分析。方法　采用凝胶层析法分离纯化法国梧桐花粉变应原 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测收集到的主要峰段的蛋白质分子质量 ,并对 7例法国梧桐花粉过敏支气管哮喘患者血清进行免疫印迹分析。结果　法国梧桐花粉变应原粗制液经SephadexG 10 0层析柱洗脱得两个洗脱峰 ,第一峰及第二峰升段富含蛋白 ;收集各段进行SDS PAGE电泳 ,第一峰升段、峰段、降段电泳图相似 ,主要含分子质量为 2 2～ 71ku之蛋白质 ,第二峰升段以分子质量为 14～ 16ku之蛋白质为主。电泳结果清晰显示 6条蛋白区带 ,分子质量分别为 71、5 0、35、39、2 2、16ku。免疫印迹分析可见 4条sIgG反应带 ,分子质量为 5 0、39、2 2、16ku。结论　法国梧桐花粉变应原含 6种主要蛋白成分 ,第一峰蛋白质含量高 ,为主要致敏组分 ;第二峰蛋白质含量少 ,为次要致敏组分。     

纯化葎草花粉变应原免疫治疗的研究

目的　观察纯化草花粉变应原特异性免疫治疗 (SIT)的疗效。方法　采取凝胶过滤方法部分提纯草花粉变应原。将 86例季节性草花粉过敏性哮喘患者随机分为纯化草花粉变应原SIT观察组 (A组 )及粗制变应原SIT对照组 (B组 ) ,采取双盲法 ,为时半年。观察临床疗效、副反应 ,以及SIT前后的T淋巴细胞亚群、皮肤试验 (IT)风团直径、嗜碱性粒细胞脱颗粒试验 (HBDT)指数及特异性IgE (sIgE)指数均值。 结果　A组总有效率 90 .7%(39/ 4 3) ,B组 79.1% (34/ 4 3,P <0 .0 5 )。A组SIT后仅 1例出现轻度副反应。两组SIT后CD4细胞及CD4/CD8显著降低 ,CD8细胞显著升高 ,且A组变化更明显。两组SIT后ID风团直径、HBDT指数及sIgE指数均值都较SIT前明显下降 (P均 <0 .0 1) ;A组SIT后上述指标下降程度较B组更明显 (P均 <0 .0 1)。结论　纯化草花粉变应原SIT的疗效优于粗制变应原 ,副作用小。提示纯化草花粉变应原SIT后对变态反应抑制性强于粗制变应原。     

葎草花粉致敏蛋白多克隆抗体的制备及其在筛选致敏蛋白组分的应用

目的制备、鉴定兔抗葎草花粉蛋白多克隆抗体,并初步应用于葎草花粉致敏蛋白组分的筛选。方法用葎草花粉变应原浸液免疫兔,获得高效价抗葎草花粉蛋白抗血清,应用琼脂免疫双扩散、ELISA法以及Western blotting鉴定产生的抗体。同时对葎草花粉过敏性哮喘患者血清进行Western blotting检测。结果兔抗血清效价经ELISA检测,效价>1∶10000,免疫双扩散结果表明抗血清只与葎草花粉变应原形成特异性IgG沉淀线,Western blotting检测兔抗血清IgG可以特异性识别葎草花粉8种蛋白组分,分子质量分别为100、88、76、69、65、55、49、38 ku,患者血清IgG可以识别5种蛋白组分,分子质量分别为100、76、55、493、8 ku。结论制备的兔抗血清具有较高效价和较好的特异性,应用该血清筛选出的葎草花粉致敏蛋白组分与患者血清筛选的组分相似,因此可进一步应用于初筛cDNA表达文库。     

不同给药途径的特异性免疫治疗的疗效及安全性

目的比较两种不同给药方式进行尘螨变应原特异性免疫治疗对缓解期哮喘患者的临床疗效和安全性。方法筛选40例缓解期尘螨过敏的哮喘患者,随机分为两组,分别给予尘螨变应原舌下含服(SLIT)和皮下注射(SCIT)脱敏治疗,总疗程为1年,观察两组的临床疗效和安全性。结果两组患者治疗前后吸入糖皮质激素日剂量、哮喘控制问卷(ACQ)、哮喘生命质量调查问卷(AQLQ)评分、尘螨皮肤试验反应度均得到改善(P<0.05),但改善程度组间比较无显著性差异(P>0.05)。两组患者哮喘得以控制的比例在治疗前后均有所增加(P<0.05),但组间无统计学差异(P>0.05)。肺功能指标、血清sIgE、嗜酸粒细胞百分比在治疗前后无明显变化(P>0.05)。SLIT组常见不良反应为局部刺激、胃肠道不适,SCIT组常见不良反应为皮疹、乏力和哮喘发作。结论尘螨变应原SLIT与SCIT特异性免疫治疗疗效相当,前者在依从性及安全性上具有更大优势。     

霜天蛾过敏性哮喘患者特异性免疫治疗的效果评价

目的　观察霜天蛾过敏性哮喘患者特异性免疫治疗 (SIT)的疗效。方法　对 6 4例确诊为霜天蛾过敏性哮喘(PAA)患者注射霜天蛾变应原浸液 ,观察临床疗效和SIT前后皮内试验风团直径、淋巴细胞亚群 (CD4、CD8、CD4/CD8)、免疫球蛋白 (IgG、IgA、IgE)、肺功能 (FEV1、PEFR)及支气管激发试验 (PD2 0 FEV1)的变化。结果　SIT总有效率为 76 .5 % (49/ 6 4 )。SIT后皮内试验风团直径缩小 ,CD8细胞增加 ,CD4/CD8比例下降 ,IgE降低 ,IgG和IgA增高 ,FEV1、PEFR、PD2 0 FEV1均增加 ,(P值均 <0 .0 1)。结论　SIT对过敏性哮喘有较好的临床疗效 ,能增强患者的细胞免疫和体液免疫功能 ,改善肺通气功能 ,降低气道高反应性     

西安市气传花粉调查

目的 调查西安市气传花粉的种类、数量及季节消长规律的特点,为当地花粉症的防治提供依据.方法 在西安市设置了3个花粉收集点,采用重力沉积法收集花粉,并对花粉形态进行观察和鉴定,历时1年.同时进行了广泛的野外植被调查,制作植物标本及标准花粉片,并对168例过敏性哮喘患者进行花粉变应原筛查.结果 全年3个花粉收集点共收集花粉13820粒,其中市中心4103粒、东郊4305粒、西郊5412粒,可归为33科、42属、33种.按花粉数量依次为杨属、松科、柏属、构属、蒿属、榆属、法桐、葎草、藜属等.植被调查发现,西安市绿化植物以杨树、柳树、松树、柏树、法桐为主,郊区杂草以艾蒿、葎草、藜草、禾本科植物为主.变应原筛查阳性率依次为艾蒿、法桐、藜草、葎草、禾本科.西安市气传花粉每年出现春季(3～5月)、秋季(8～9月)2个飘逸高峰期,春季以杨属、松科、柏属、构属、法桐等木本植物花粉为主,秋季以蒿属、葎草、藜草等草本植物为主.结论 艾蒿、法桐、藜草、葎草、禾本科可能系西安市的主要致敏花粉.提前对花粉变应原筛查阳性者进行特异性免疫治疗对控制哮喘发作极为重要.     

西安地区支气管哮喘鳞翅目昆虫致敏原的研究

调查了西安地区鳞翅目昆虫动态及哮喘蝶、蛾致敏原种类。结果发现，于1995年的4～11月份可捕捉到这类昆虫，7～8月份的捕捉量最大；全年的71个捕虫日中，共捕捉蝶、蛾1325只，属14科．52种。其中，夜蛾科居首位，天蛾科次之，余依次为眼蝶科，尺蛾科，粉蝶科等。将上述优势鳞翅目昆虫翅制成单价变应原，给当地哮喘患者作皮试，发现夜蛾科、天蛾科及物蝶科3+以上皮试阳性反应率30％以上，提示它们可能为西安地区哮喘鳞翅目昆虫致敏原。