某款山区版载货车翻转机构的设计

山区弯多、路颠、坡陡的路况,对驾驶室和底盘的链接部件,即翻转机构的强度和缓冲性能有较高的要求,保障车辆在山区路况的行车安全性。通用型产品的翻转机构不适合在山区版车型上使用,存在使用安全隐患。文章通过某款山区版车型翻转机构的设计描述了翻转机构的结构设计,即提升产品质量又消除了使用安全隐患。     

Bmi-1基因过度表达与喉癌的分化、转移及预后的关系

目的探讨喉癌组织中Bmi-1基因mRNA的表达与喉癌的分化、转移及临床预后的关系。方法收集我们医院2008年5月~2008年11月共52例行喉癌手术切除的标本,提取肿瘤组织及癌旁组织配对标本的总RNA,采用RT-PCR方法测定Bmi-1基因mRNA的表达,Western blot法分析Bmi-1蛋白的表达水平,并结合临床资料对Bmi-1基因差异表达与喉癌患者的临床表现进行相关性分析。结果 52例配对标本分别进行Bmi-1mRNA荧光检测比较,39例标本的肿瘤组织中Bmi-1基因mRNA的表达明显高于癌旁正常喉组织;32例标本的肿瘤组织中Bmi-1蛋白表达明显高于癌旁正常喉组织;Bmi-1mRNA的表达与喉癌淋巴结转移和浸润深度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、吸烟及肿瘤分化程度等无关(P>0.05)。结论 Bmi-1基因在喉癌组织中的表达状态与喉癌的生长和浸润转移关系密切;Bmi-1基因mRNA可望作为喉癌病情发展及指导临床治疗的标记物之一;Bmi-1mRNA的测定有助于判断肿瘤预后。     

反义HSP70真核表达载体的构建和在人喉癌细胞的表达

目的　进行促凋亡治疗喉癌实验 ,构建和鉴定携带反义HSP70 (heatshockprotein 70 )基因的真核表达载体。方法　将HSP70cDNA反向克隆入 pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体 pcDNA AHSP70 ,用酶切鉴定结果 ;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep 2 ,G4 18筛选阳性克隆 ;westernblot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状。结果　获得 pcDNA AHSP70真核表达载体 ,HSP70反义RNA阻断了Hep 2细胞的HSP70的表达 ,经westernblotting和免疫组化证实 ,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70 ,而对照和空载体组高表达HSP70。转染反义HSP70的真核表达载体的Hep 2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢 ,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰 ,而空载体组没有。结论　本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达。     

腺病毒携带GFP在豚鼠耳蜗基因转导的形态结构与功能改变

目的　带有绿色荧光蛋白 (GFP)基因的腺病毒注入豚鼠耳蜗后 ,观察不同时间段GFP基因的表达和分布情况及手术操作对听力的影响 ,为内耳基因治疗提供理论依据。方法　 1 5只杂色豚鼠术前及术后行听性脑干反应 (ABR)和畸变耳声发射 (DPOAE)检查 ,空白对照组经圆窗或底回钻孔注入人工外淋巴液。实验组注入带有GFP基因的腺病毒。分别于 3、5、7和 1 0d后取材 ,耳蜗标本经硝酸银染色后铺片。结果　腺病毒注入耳蜗后对听阈影响不大。术前术后的DP值有差异。荧光显微镜下可见 3d组表达产物最高。 7d后逐渐减弱 ,1 0d后更弱 ,表达产物主要分布于支持细胞、螺旋神经节细胞和基底膜下的间皮细胞。对照组均无绿色荧光。结论　通过圆窗或底回注入腺病毒对听阈没有影响。单一位点的接种就能使神经营养因子通过耳蜗液扩散到整个耳蜗。有效的基因转移在耳蜗是可行的 ,但表达相对短暂。     

COX-2反义核酸对喉癌恶性生物学行为的抑制作用

目的 探讨环氧合酶 2(COX-2)反义核酸对喉癌细胞恶性表型的抑制作用.方法 采用脂质体介导方法,分别构建转染COX 2反义真核表达载体和空载体的喉癌细胞系Hep-2-AS和Hep-2-P细胞.RT-PCR及Western blot分析转染细胞COX-2-mRNA及蛋白表达水平;MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞的体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性.结果 RT-PCR结果显示,Hep-2-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA比值(0.65)明显低于Hep-2(0.92)和Hep-2-P细胞(0.90);Western blot结果提示Hep-2-AS细胞COX-2/βactin比值(0.29)明显低于Hep-2细胞(0.46)和Hep-2-P细胞(0.44);MTT比色实验显示Hep-2-AS细胞较Hep-2-P、Hep-2细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d;体外侵袭实验结果表明,Hep 2-AS侵袭细胞数(18.20±5.97)显著低于Hep-2细胞 (45.40±8.12)及Hep-2-P细胞(44.10±6.47)(P<0.01).裸鼠成瘤实验中,Hep 2-P、Hep-2细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而Hep-2-AS细胞第7天肿瘤长出;28-d后Hep-2-AS细胞接种组瘤体体积[(764.85±129.61)mm3]低于Hep-2细胞[(1181.73±360.83)mm3]和Hep-2-P细胞接种组 [(1065.21±237.46)mm3],有显著性差异(P<0.01).结论 喉癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义核酸技术抑制COX 2表达可以逆转喉癌细胞的恶性表型.     

增龄相关听力丧失小鼠耳蜗毛细胞表型与基因突变的关系

目的　观察增龄相关听力丧失 (AHL)小鼠耳蜗毛细胞病理改变的超微结构 ,为老年性聋病理生理及临床表现+基因表型提供形态学改变依据。方法　应用扫描电镜 (SEM)观察BALB/c小鼠耳蜗Corti器毛细胞的超微结构改变 ,测定动物ABR反应阈值。DNA提取PCR扩增分析基因型。结果　 6月龄BALB/c小鼠耳蜗底回内外毛细胞有连续的缺失 ,静纤毛束有融合、散乱、变短和失去劲度。ABR阈值呈中到重度听力损失。证明种系特异的Ahl基因位点和基因功能。结论　耳蜗毛细胞静纤毛束融合、散乱、变短是老年性聋早期的主要病理改变 ,mdfw与Ah1的表现形式是同一基因位点 ,可能与myosin基因突变有关。     

HAIR CELL-LIKE CELL GENERATION INDUCED BY NATURE CULTURE OF ADULT RAT AUDITORY EPITHELIUM

Objective To establish adult rat auditory epithelial cell culture and try to find precursor cells of auditory hair cells in vitro. Methods With refinement of culture media and techniques, cochlear sensory epithelial cells of adult rat were cultured. Immunocytochemistry and Bromodeoxyuridine （BrdU） labeling were used to detect properties and mitotic status of cultured cells. Results The cultured auditory epithelial cells showed a large, flat epithelial morphotype and expressed F-actin and cytokeratin, a subset of cells generated from auditory epithelium were labeled by calretinin, a specific marker of early hair cell. Conclusion Adult rat auditory epithelium can be induced to generate hair cell-like cells by nature culture, this phenomenon suggests that progenitor cells may exist in rat cochlea and they may give birth to new hair cells. Whether these progenitor cells are tissue specific stem cells is still need more study.