2型糖尿病患者肠道乳酸菌属和消化链球菌属定量研究及其意义

目的对2型糖尿病患者与健康人肠道乳酸菌属和消化链球菌属进行定量分析,探讨两组人群肠道菌群的差异。方法提取肠道菌群总DNA,利用菌属特异性引物实时荧光定量PCR扩增,制作菌属标准品和标准曲线,定量分析两种优势菌属在糖尿病患者和健康人群中的含量。结果与健康对照组相比,2型糖尿病组肠道消化链球菌的数量均显著减少,而乳酸菌属的数量两组间无统计学差异。结论荧光定量PCR方法可作为研究肠道菌群的一种准确、敏感的检测方法;糖尿病患者肠道优势菌属发生变化,提示肠道优势菌群可能与糖尿病的发生发展有一定的相关性。     

临床致病性不动杆菌的分子生物学鉴定

目的对临床致病性不动杆菌进行种属鉴定,并比较3种方法(44℃生长试验、特异性引物PCR扩增和16SrRNA测序)对鲍曼不动杆菌鉴定的特异性、准确性及应用价值。方法收集临床致病不动杆菌56株,首先接种在胰蛋白胨大豆肉汤中44℃进行培养,观察是否可以生长;其次,提取56株不动杆菌基因组DNA,用两组不同的特异性引物进行PCR扩增鉴定;最后,用通用引物对56株不动杆菌的16SrRNA进行测序鉴定。结果 56株不动杆菌中有17株可在44℃生长。经特异性引物PCR扩增鉴定,发现8株鲍曼不动杆菌和3株13TU型不动杆菌均可在44℃中较早较快生长。金标准16SrRNA测序确定56株不动杆菌中含有9个种,其中鲍曼不动杆菌和13TU型不动杆菌的鉴定结果与特异性引物PCR扩增法相同。结论应用分子生物学方法鉴定鲍曼不动杆菌具有准确、高效且可重复性高的优点,尤其是特异性PCR扩增法,可作为较难诊断的鲍曼不动杆菌的首选鉴定方法。     

结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测

目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表...     

肺结核患者红细胞免疫状态的研究

采用酵母菌花环法检测了44例肺结核患者红细胞C_3b受体活性及免疫复合物粘附量,并对其中15例进行了C_3b受体对血清免疫粘附抑制因子及促进因子反应的观察。结果表明,肺结核患者C_3b受体花环率及免疫复合物花环率均明显高于正常对照组(P0.05);与正常对照组相比,肺结核患者C_3b受体对正常人血清中的免疫粘附抑制因子的反应性无明显改变(P>0.05),而对免疫粘附促进因子反应性增强(P<0.01)。     

2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析

目的 分析2型糖尿病患者肠道拟类菌属和双歧杆菌属的多样性及其与健康个体的差异,探讨糖尿病与肠道优势菌属的相关性.方法 收集2型糖尿病患者和健康志愿者粪样,提取样品中菌群总DNA,利用拟类菌和双歧杆菌16SrRNA种属特异性引物,进行PCR扩增,将产物用变性梯度凝胶电泳分离,获得肠道菌群分子指纹图谱,进行多样性和相似性等特征分析.结果 糖尿病组和健康人组样品DGGE图谱多样性指数范围分别是:拟类菌属0.89(0.75～0.95),0.95(0.89～0.97);双歧杆菌属:0.85(0.75～0.94),0.87(0.73～0.93).组内成对相似性系数累积曲线分析,拟类菌属:小于0.5的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的85.83%,而健康人组只占到35.71%;双歧杆菌属:小于0.4的Cs值在糖尿病组占到总Cs值个数的90%,健康人组占到总Cs值个数的60.7%.结论 糖尿病患者和健康人肠道拟类菌属和双歧杆菌属指纹图呈现个体特异性,糖尿病患者两种菌属多样性与健康个体无显著差异,而糖尿病患者个体之间的相似性较健康个体之间低.