芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

企业研究与开发费用会计处理方法的探索

对于企业研究与开发费用的会计处理方法，目前理论界和实务界仍未达成一致意见，本文在吸收传统会计处理方法优点的基础上，提出了一种新的方法，并对新方法的合理性作了论述。     

传媒业上市公司无形资产减值准备的分析

随着社会主义市场经济的不断深入和改革开放的日益深化,传媒业已不仅仅是宣传媒体了,它还需要强化市场经营行为来发展壮大自己。时下,伴随着我国传媒的逐步发展,媒介市场的无形资产日益突出其巨大的增值或贬值效益,所以传媒的无形资产减值准备也备受关注。     

外购商誉的计量

企业并购浪潮的涌现，将会出现巨额的外购商誉。通过对现行商誉会计理论的反思，探讨了外购商誉的确认，计量，摊销及减值等问题。     

关于船员综合素质教育与提高途径的探讨

简要提出了单个船员综合素质教育与提高、单船船员整体素质教育与提高、船员群体素质教育与提高的途径和方法。     

浅谈科研院所无形资产的流失与防范

资产的保值增值是企事业单位财务管理的重要环节,但重有形资产管理、轻无形资产管理是普遍存在的现象.科研院所采取有效措施加强无形资产管理、防范无形资产流失,已成为确保自身健康发展必须尽快解决的重要问题.     

单个随机集中载荷作用下弹性基础梁的响应

较系统地分析了弹性基础梁在单个随机载荷作用下的振动，研究了它的动力响应的概率特征．     

无形资产评估咨询系统的开发

本文介绍了一个用超文本技术开发的无形资产评估咨询系统，它能方便地为用户提供有关无形资产的基本概念，法律条文的咨询，疑难问题的解答，以及各类无形资产的评估方法。