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《西安交通大学学报(医学版)》2019,(3):459-464
目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。 相似文献
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橡胶减振元件在国外高速客车转向架上已广泛应用。本文介绍我国近几年研制成功的准高速客车转向架(206WP、206KP、209HS、CW-2型)以及正在研制的250km/h高速转向架橡胶减振元件的性能、结构特点、室内试验、装车试验、运用推广。利用橡胶元件的优越性能改善转向架的动力性能、提高车辆的运行品质、实现无磨耗结构,对提高我国客车转向架制作水平和运行速度起到了重要作用。环行线和广深线客车动力学试验 相似文献
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金属橡胶液体复合弹簧的发展和应用 总被引:1,自引:0,他引:1
介绍了橡胶减振器的产生和发展过程,以及金属橡胶液体复合弹簧的发展与应用,着重介绍了铁路车辆用的金属橡胶液体复合弹簧的性能,最后简述了这种弹簧今后的发展情况。 相似文献
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美国翰德森(HENDRICKSON)公司是专业从事中型和重型车辆悬架系统设计和制造的跨国公司,年销售额达6.3亿美元,是世界上最大的悬架系统供应商。该公司成立于1913年,1926年开始生产悬架系统。目前,翰德森不仅是北美洲所有车辆生产商的供应商,同时也是欧洲、澳大利亚、日本、拉丁美洲等许多车辆生产商的供应商。翰德森公司现有员工3000 相似文献