芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

制备工艺对冷拌环氧沥青相容性的影响研究

冷拌环氧沥青因其可以常温施工、力学性能优良、养护时间短、节能环保等优点在钢桥面铺装上受到越来越多的关注,然而冷拌环氧沥青的不同制备工艺对其性能影响较大.通过粘度测试、荧光显微镜观察和拉伸试验来研究不同搅拌温度、搅拌速率和搅拌时间对冷拌环氧沥青相容性的影响.结果表明:搅拌温度和搅拌时间对B组分及混合物的粘度和沥青的分散特...     

文丘利型油燃烧器出口气液两相流动与燃烧的数值模拟

针对选配文丘利型油燃烧器的燃油锅炉中液雾燃烧的特点,在冷态等温流场数值模拟结果及 EBU-Arrhenius模型模拟气相燃烧所得结果的基础上,数值模拟了单只文丘利油燃烧器出口的气液两相 流动与燃烧,给出了流场中的速度场、温度场以及浓度场的分布信息,这些结论可为该型燃油锅炉的进 一步设计和运行以及燃烧室的布置提供有益的依据。     

可扭转的特殊电缆

用于扭转运动的带屏蔽电缆经常会失效。易格斯研发出了一种带屏蔽的三维电缆,其单芯芯线可承受高度扭转。与传统的抗损坏铜屏蔽不同,该电缆使用了可抗扭转的镀锡铜屏蔽护套,由扭转运动产生的大部分压力都可被护套、屏蔽和绝缘材米斗之间的滑行缓冲元件所吸收。外护套材料也是由耐磨损性能极佳的高品质TPE混合物制成的。     

德国EROCKIT 首批高速电动自行车目前正式批量推向市场

"eROKITs"高速电动自行车现已批量投产德国EROCKIT生产的首批"eROKITs"高速电动自行车目前已从货栈运出,正式批量推向市场。据介绍,这种高速电动自行车在穿越马路时可将接近十字路口交通指挥灯旁的汽车一下子甩在后面。称之为"人性化-混合物"的此种高速电动自行车,其实在几年前就已推出。今天,交通管理部门已准许其投放城市交通,并可批量上市销售。     

海上火箭二代史上最快水翼帆船

保罗·拉森（Paul Larsen），梦想的实现者。他在十天内三次刷新自己的纪录，超越了风筝冲浪，将500米单船的帆速提升到65．37节。今天，我们要介绍的就是“维斯塔斯海上火箭二代”（Vestas Sailrocket2）在前不久创下的惊人纪录。今年年初，刚刚传来一条爆炸性新闻：一艘帆船刷新了之前由冲浪风筝创下的速度纪录，并且逼近了传说中所说的终极水上风帆速度记录60节!可是，就在十天后，就在我们还没有从这样的双重震撼中缓过气来的时候，那个“传说中所说的终极时速”已经被无情地打破。     

思想麻痹酿成惨剧

<正>1.油船油罐卸油期间的防火安全应比其装油时更为重要油船油罐卸油时较之其装油时较少产生静电,更不易在内罐内、舱内积聚静电,鉴于这一点,人们往往认为"卸油比装油安全"。其实不然,油船油罐在卸货过程中会使舱内、罐内吸入大量新鲜空气而形成大量爆炸性混合物,随着有限空间不断增大,爆炸混合物也相应增多,从而使之爆炸危险性增大,综合破坏力也相对增强。特别是货油接近卸空和进行扫线扫舱过程中,如操作不当、压力控制不妥,同样会产生大量静电,还会发生泵     

岩质坡面喷混快速绿化新技术

传统的绿化方法对高等级公路开挖后裸露的岩质边坡难以直接绿化.喷混绿化新技术利用特制喷混机械将土壤、肥料、有机质、保水材料、植物种子、水泥等混合干料加水后喷射到岩面上,由于水泥的粘结作用,上述混合物可在岩石表面形成一层具有连续空隙的硬化体,种子可以在空隙中生根、发芽、生长,而一定程度的硬化又可防止雨水冲刷,从而达到恢复植被、改善景观、保护环境的目的.     

中国建高铁属明智之举

针对中国修建高铁引发的争论，华尔街日报6月14日发文指出，高铁工程并非是应对全球性金融危机的一种孤注一掷的行为，面对爆炸性增长的货运线路，高铁是对急需升级的中国铁路系统进行的一项经过长期规划的精心考虑之举。