芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

一种船舶吃水差的精确计算方法

此文通过分析纵倾状态下船舶吃水差传统计算方法中的误差，提出了一种适合于纵倾，特别是在较大纵倾状态下船舶吃水差的精确计算方法，该方法通常可以在具备一定船舶资料的条件下采用，也可以在船舶装载软件的设计中采用。     

2Mb/s电路对接的故障分析

2Mb／s电路的对接，是指将相同或不同设备间的2Mb／s电路以直接或间接的方式连接起来。这是通信网络中最常用的一种电路调度形式，然而在实际应用中总会出现一些奇怪的故障，令维护人员大伤脑筋，以下举例进行分析。[第一段]     

大型浮船坞海上对接工艺浅析

2l世纪我国将逐渐成为世界修造船中心。钢质浮船坞，由于建造时间短、不占用码头岸线和厂区、移动方便、易于环保等优点，特别是我国修造船中心加快向岛屿转移，浮船坞越来越受到船舶工业的青睐。为缩短浮船坞在船台或坞内建造时间，尽快投入运营，分段建造、水面对接成为降低建造成本的首选，旧坞改造更是如此。     

乌克兰研制出宽窄轨对接转换装置

本刊讯 乌克兰打算为“东西方国际（铁路）交通走廊”提供新的技术保障——乌克兰基辅交通经济技术大学研制的自动化宽窄轨转换装置。     

混凝土方桩拼接方法的探讨

通过分析比较两邻近码头基桩施情况，介绍需拼接的预应力混凝土空心方桩，在预制时将空心胶囊从桩头沿桩轴心直出，减少出口处的应力集中，拼接时采取空心对接，保持桩身中部空心段刚度一致。同时拼接后桩尖，桩顶仍为实心段，对接桩时应保持上下桩轴线重合，焊接采取管道送风加速接缝冷却。     

二维非连续边界元分析积分计算的精确表达式

以二维弹性力学问题为研究对象,采用线性非连续元离散边界积分方程,给出了系数矩阵计算的精确表达式,对二维弹性力学问题进行了数值计算,对非连续边界元配位点对计算结果精度的影响进行了讨论,结果表明准奇异积分计算是配位点影响计算结构精度的主要因素。     

大管棚双向对接技术在圆梁山隧道2#溶洞整治中的应用

在溶洞发育的可溶岩地层修建隧道,极易发生突泥涌水灾害,在治理溶洞的众多方法中,大管棚支护技术能起到防塌与增加结构强度的重要作用。介绍管棚技术的设计、施工及安装过程。