PDCD5基因在初诊Graves''''病患者PBMCs中表达情况的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。     

大骨节病和腺病毒感染的相关性研究

目的研究腺病毒感染与大骨节病(KBD)发病的关系。方法用巢式聚合酶链式反应(Nest-PCR)检测KBD病区和非病区儿童全血及KBD患者血清接种软骨细胞的腺病毒DNA,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测KBD病区和非病区儿童血清腺病毒IgG抗体。结果KBD病区KBD儿童、病区对照组儿童和非病区儿童全血腺病毒DNA的阳性率分别为33.33%、34.92%和28.57%,腺病毒IgG抗体的阳性率分别为68.29%、65%和68.97%,差异无统计学意义(P>0.05);KBD患者血清培养细胞腺病毒DNA的PCR结果均为阴性。结论KBD病区和非病区儿童腺病毒均有较高的检出率;KBD的发病和腺病毒感染可能无直接病因学关系。     

纸层析发校法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰ－ＮＢＴ）显色后判断结果，结果 这一技术允许在２５ｍｉｎ内交将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出，结论     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗的构建及初步免疫观察

目的　构建用于防治单纯疱疹的核酸疫苗并观察其免疫效果。方法　用PCR反应 ,从HSV 1F株基因组DNA中扩增出 gD蛋白的全部编码序列 ,将其插入 pcDNA 3 1 (+)的PCMV下游 ,构建HSVgD核酸疫苗 ,并用酶切分析和测序鉴定 ;通过中和试验、ELISA方法和攻击试验检测用 pLy D三次肌肉接种小鼠的免疫效果。结果　经鉴定证实了HSV gD核酸疫苗 pLy D的构建 ;实验小鼠产生了对HSV 1特异性的抗体 (抗体滴度 :ELISA法 1∶2 0 3,中和试验法 1∶37) ,并经受了HSV 1病毒的攻击 (存活率 :70 % )。结论　成功构建出了HSV gD核酸疫苗pLy D ,用其接种小鼠可以诱导产生特异性免疫反应 ,并具有良好的保护作用。     

聚合酶链式反应方法筛查慢性阻塞性肺疾病常见致病菌

目的对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期及急性加重期(AECOPD)患者痰标本进行细菌学分析,筛查常见致病菌的感染情况,探索细菌感染与COPD发病及进展之间的关系。方法选择7种COPD常见致病菌(肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡它莫拉菌和鲍曼不动杆菌)的特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法,对42例COPD稳定期患者、66例AECOPD患者和11例正常人痰标本进行检测,筛查上述病原菌的感染情况。结果肺炎克雷伯杆菌在稳定期检出8例(19%),AECOPD检出4例(6.1%);铜绿假单胞菌在稳定期检出2例(4.8%),AECOPD检出11例(16.7%);肺炎链球菌在稳定期全部检出(100%),AECOPD检出26例(39.4%),正常对照组全部检出(100%);金黄色葡萄球菌在稳定期未检出,AECOPD检出6例(9.1%);流感嗜血杆菌在稳定期检出39例(92.9%),AECOPD检出51例(77.3%),正常对照组全部检出(100%)。正常对照组以下各菌均未检出。卡它莫拉菌在稳定期检出12例(28.6%),AECOPD检出6例(9.1%);鲍曼不动杆菌在稳定期检出3例(7.1%),AECOPD检出5例(7.6%)。肺炎克雷伯杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和卡它莫拉菌在COPD稳定期和AECOPD间的检出率差异有统计学意义(P<0.05),铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌在两组间的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。测序结果与检出结果一致。结论 COPD稳定期患者上呼吸道菌群水平接近正常人,而AECOPD患者明显降低。某些细菌感染是AECOPD发病的主要原因,但并非所有细菌感染都与COPD疾病进展有关。     

山区公路路基沉陷风险识别方法研究

为正确识别路基沉陷灾害,应用灾害链式反应理论,研究了山区公路路基沉陷灾害的反应机理,提出路基沉陷发育阶段的划分方法以及路基沉陷风险的识别方法。以国际风险度指数R为依据,结合实际工程调查结果,对路基沉陷风险进行等级划分,并作为灾害治理的依据。     

宫颈癌组织表皮生长因子受体对TKI敏感性相关的基因突变研究

目的研究宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因中是否存在与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)药物敏感性相关的18、19及21外显子突变,为本地区宫颈癌的靶向治疗提供依据。方法收集70例宫颈癌患者的新鲜癌组织标本,提取DNA,以特异性引物PCR扩增EGFR基因外显子18、19及21,进行DNA测序并分析序列相似性。结果 70例宫颈癌组织提取质量良好的DNA中,均未检测到EGFR基因18、19及21外显子突变。结论宫颈癌组织EGFR基因外显子18、19及21突变罕见。     

PDCD5基因在初诊Graves'病患者PBMCs中表达情况的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。     

人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆

目的　扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因 ,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法　收集乳腺癌患者外周转移淋巴结 30例 ,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA ,行RT PCR扩增 ,制备T载体 ,用于PCR产物的克隆。结果　总RNA纯度高 ,完整性好 ,mRNA获得率为 1%。经RT PCR ,VH、Vλ、Vκ的每一条 5 '端引物均与其相应的 3'端引物成功地扩增出了可变区基因片段 ,轻、重链T载体库分别为 1.7× 10 8和 3.5× 10 8。结论　所采用的引物能够10 0 %扩增目的片段 ,T载体过渡能显著提高克隆效率 ,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。