芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

高速公路填砂路基边坡防护的探讨

南昌市乐化至温家圳段高速公路,沿线土源匮乏,为减少占用良田,设计考虑了用河砂筑路堤即填砂路基。文章针对填砂路基和周边环境的特点,在边坡的防护方案上进行反复比选、认证,将原设计进行了优化。所选定的生态防护方案施工工艺简便,提高了防冲刷能力及边坡的整体稳定性。     

砂桩的振动成桩法施工工艺

介绍砂桩的振动成桩法施工中，施工工艺的选择。     

大型砂围堰施工工艺与特点

大型砂围堰是一种少见的围堰。文章以福建省九龙江北溪桥闸除险加固工程为例，介绍和总结了砂围堰的施工工艺与特点。     

影响水泥灰土稳定砂基层压实率的因素与对策

本文结合水泥灰土稳定砂路拌法施工，对影响水泥灰土稳定砂路面结构层压实度的因素－－延迟时间、含水时、配合比、闷料时间、碾压、测试手段等进行了定量分析和定性分析。并针对主要影响因素提出了提高水泥灰土稳定砂路面结构层压实度对策。     

钙质结核（礓石）土填筑路基的压实质量检测方法初探

介绍了徐州东绕城高速公路贯汪一合同段的钙质结核（礓石）土填筑路基采用的质量检测方法，系统分析了灌砂法检测压实废使用的四种标准曲线及其室内试验方法和使用方法。     

利用孔压静探确定软土地基的强度

将孔压探头贯入近似为孔穴扩张的过程，通过对探头的受力分析，得到了由孔压静探确定的饱和软粘土的不排水剪切强度值，采用此方法对广东西部沿海高速公路二标段软土地基的强度进行了估算，并与十字板试验的测试值作了对比，验证了方法的可行性。     

对山区河床砂卵石层工程地质钻探技术的探讨

以阳山连江大桥为例,介绍了对山区河床砂卵石层进行工程地质钻探时,采用“小管套大管”的新的护壁怯代替传统的“大管套小管”护壁法的具体做法和应用效果。