EHF病毒在传代鸡胚上的实验观察

本文报道了用已知EHFV seoul株接种9～10d龄鸡胚后鸡胚出现严重局限的出血斑;ELISA试验显示感染鸡胚尿囊液和对照鸡胚尿囊液OD值之比>2.1;免疫荧光试验在感染鸡胚心、脑、肺、肝、肾组织印片细胞浆内可见不同程度荧光颗粒。     

人PIF1及其截短体重组蛋白的真核表达及其细胞内定位

目的构建人PIF1及其C末端解螺旋酶模序(PIF1C)和N末端PINT结构域(PIF1N)截短体真核表达重组质粒,进行真核表达,并确定PIF1、PIF1C、PIF1N在细胞内定位。方法以HeLa cDNA为模板PCR获取PIF1、PIF1C、PIF1N编码区cDNA,将其插入pCMV-Tag 2B质粒中构建PIF1、PIF1C、PIF1N真核表达重组质粒;通过lipofectamine2000将重组质粒转染人293细胞中,Western blot方法检测其在真核细胞内的表达,用免疫荧光法检测其细胞内定位。结果成功构建了PIF1及其截短体真核表达重组体,并在真核细胞内成功表达。确定PIF1定位于核内,PIF1C定位于整个细胞,呈弥散分布,PIF1N主要定位于核内。结论在真核细胞中成功表达了PIF1、PIF1C、PIF1N,且发现PIF1N对PIF1的入核起重要作用,为进一步研究其PIF1及其各结构域奠定了实验基础。     

蛋白芯片技术对8种自身抗体的检测及其评价

目的　研究蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性及特异性,探讨其对自身免疫性疾病的鉴别诊断价值,并对其方法学进行评估。方法　用胶体金标法、间接免疫荧光法及蛋白芯片法检测抗 ds- DNA;用免疫印迹法、蛋白芯片法检测抗Sm 、抗u1RNP 、抗SSA、抗SSB 、抗Rib- P、抗 Jo -1及抗 Scl- 70 7 种自身抗体,对检测结果进行统计学分析。结果　抗dsDNA抗体检测,蛋白芯片法优于胶体金标法 (P<0.01);皮肌炎和多发性肌炎(DM/PM)组 Jo -1 抗体(P<0.01)、混合性结缔组织病(MCTD)组u1RNP抗体(P<0.01)、硬皮病(PSS)组 Scl- 70 抗体(P<0.05),蛋白芯片法与免疫印迹法检测结果存在显著性差异;在 DM/PM组、PSS组、MCTD组,蛋白芯片法与免疫印迹法对自身免疫性疾病的鉴别诊断有显著性差别(P<0.05)。4种方法的总体敏感性依次为蛋白芯片法、免疫印迹法、间接免疫荧光法、胶体金标法。结论　蛋白芯片法检测项目多、简便快速、敏感性好、特异性强、分析客观,值得推广使用。     

小儿T淋巴细胞亚群的正常值的探讨

本文采用抗人T淋巴细胞单克隆抗体免疫荧光技术,对35例健康小儿的T细胞亚群进行了初步探讨。检验结果7岁～11岁健康小儿的CD_366～70%,CD_436～40%,CD_827～32%,CD_4/CD_8 0.86～1.76。本组资料的测定值与武汉、上海的类似研究进行了初步比较,对有关T细胞亚群的临床应用情况进行了初步讨论。鉴于健康小儿的T细胞亚群值报道甚少,建议本组测定值可作为类似研究时之参考值。     

人CAP1蛋白与PIF1解螺旋酶及其剪接体蛋白的相互作用

目的在细胞水平及体外验证腺苷酸环化酶相关蛋白1(CAP1)蛋白与PIF1解螺旋酶及其剪接体是否存在相互作用。方法采用激光共聚焦免疫荧光实验,通过细胞内蛋白共定位确定蛋白质间的相互作用关系;GST Pulldown实验在体外验证CAP1与PIF1及其剪接体是否存在直接的相互作用。结果激光共聚焦免疫荧光实验显示,CAP1与PIF1全长蛋白及其剪接体BC018978没有共定位,但与剪接体AF108138C存在共定位。GST Pull-down未检测到CAP1与PIF1全长及其剪接体的相互作用。结论 CAP1与PIF1剪接体蛋白可能存在非直接相互作用。     

尖锐湿疣患者外周血T细胞亚群的检测

用T淋巴细胞单克隆抗体和间接免疫荧光技术(IFA)检测尖锐湿疣患者及健康人各20例外周血T淋巴细胞亚群。发现初期患者CD_3阳性细胞百分数显著下降;CD_4,CD_4/CD_8比值也显著下降;CD_8阳性细胞百分数却显著升高;恢复期患者T细胞各亚群比例趋于正常。     

蛋白印迹法与免疫荧光法检测白血病患者Survivin表达

目的　比较蛋白印迹法和免疫荧光法检测Survivin表达结果,以探寻临床上切实可行的检测方法。方法　应用蛋白印迹(Western blots)和免疫荧光法检测18例白血病患者和10例正常对照组外周血中单个核细胞Survivin的表达。结果　Western blots 法检测Survivin 表达阳性13 例(72. 2%);免疫荧光法检测Survivin 表达阳性11 例(61.1%)。两种方法检测10例正常对照组外周血单个核细胞中Survivin的表达均为阴性。两种检测方法的符合率为88.89%。结论　Survivin是否表达可能成为白血病临床诊断、预后判断的有效指标。两种检测方法具有良好的一致性,免疫荧光法操作比较简单,适于在临床上应用。     

雄激素受体与1型糖尿病胰腺β细胞增殖和凋亡的关系

目的雄激素受体可介导广泛的细胞活动,如增殖、分化和凋亡等。本实验试图确认雄激素受体（AR）存在于胰腺β细胞内,并研究其在1型糖尿病发展过程中的作用。方法多次低剂量链脲佐菌素（STZ）诱导形成小鼠1型糖尿病模型,分别于糖尿病第1天、第4周、第12周及第20周将模型鼠处死,同时设同龄正常对照。随着糖尿病的发展,以免疫荧光双标、免疫荧光三标、半定量RT-PCR检测AR表达的改变,并了解和胰腺β细胞增殖与凋亡的关系。     

羊抗人IgG荧光抗体与大鼠血清间单向交叉反应初步研究

在采用ＩＦＡＴ检测ＥＨＦ抗体实验中，意外地观察到羊抗人ＩｇＧ荧光抗体与鼠血清反应存在单向交叉，其稳定性、敏感性与羊抗鼠ＩｇＧ荧光抗体和鼠血清反应基本一致。     

大疱性皮肤病的直接免疫荧光检查

本文报告了对21例天疱疮病人(其中寻常性10例,红斑性天疱疮11例),11例大疱性类天疱疮和6例其他大疱性皮肤病的直接免疫荧光检查结果,作者认为直接免疫荧光检查对于大疱性皮肤病的诊断和鉴别诊断有重要意义。