芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

河钢塞钢对中国港口开拓海外市场的启示

面对机遇与风险并存的局面,中国港口企业如何学习河钢塞钢管理团队的成功经验,在"走出去"的过程中,用最短时间实现最大化发展近几年,随着"一带一路"倡议转入实体层面的推动,中国港口企业纷纷走出国门,积极开拓海外市场,投资项目的数量和规模不断扩大,取得了不错的成绩。     

印度摩托车市场前景广阔

在印度城乡各地,摩托车是最主要的交通工具。上下班高峰时段,摩托车队几乎溢到了人行道上。根据印度政府2002年的统计,在购买家庭交通工具方面,印度1.807亿个家庭中,只有不到10%的富裕家庭选择汽车,其余中低收入的家庭主要选择摩托车。印度交通不发达,停车场严重短缺,大部分白领阶层为了行动方便,也把摩托车当成主要交通工具。另外,印度人结婚时,女方父母再穷也要借钱买一辆摩托车送给新郎,否则新娘难进新郎家门。     

骑式车，将流行什么款式？

20世纪80年代,以JH70款、五羊款和铃木王款为主的骑式车,占全国市场份额的70％,引导着我国摩托车市场的消费趋势和潮流。然而,自1997年以后,踏板、弯梁和太子三种车型不断推出新款,骑式车却没有推出市场认可度较高的新款,市场占有率节节下滑。骑式车到底流行什么款式,是摩托车业一直在探讨、分析和研究的问题。     

消防巨擘——1：16美国通用汽车雪佛兰消防卡车仿真模型

通用汽车公司创建于1908年，其汽车产品销往200多个国家。2001年，通用汽车的轿车和卡车销售量高迭850万辆，占全球汽车市场逾15％的份额，超过其他任何一家汽车制造商。     

别克GL8汽车配件市场价格(二十)

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21世纪初世界汽车工业发展趋势

据有关国际机构的研究，尽管当前全球范围内的汽车工业因受世界整体经济形势欠佳的影响而呈现能力严重过剩、销售下滑、盈利减少等种种不景气现象，但这些困难终将被克服，随着技术创新步伐的加快和新兴地区及国家对汽车需求的不断增长，世界汽车工业的复苏指日可待，其发展前景犹可乐观。不过，只有     

车祸

市场上专业经营汽车音响的店较少，多是洗车、美容、修车店捎带手安装汽车音响，技师没有经过专业安装培训，音响安装后经常出现各种各样的故障，甚至线路失火使汽车无法使用。购买汽车音响不要盲目，一定要多问、多看、多听，尽量避免上当。     

劣质产品危害大消费者需谨慎

3·15刚过,与往年相比,今年零部件市场的假冒现象少了许多,但是大量的劣质产品依然泛滥于市场之中。 车毁人亡的惨痛教训 记者不久前听到这样一个案例:一消费者购买劣质横拉杆总成一套,使用中,拉杆螺丝杆断裂,导致汽车转向失灵,冲入慢车道,造成一死一伤的重大交通事故。尽管事后经销商和生产厂家均受到了