芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

长寿命氧气等离子孤切割技术及其在造船厂的推广应用

本文介绍了长寿命氧气等离子弧切割的原理，对其应用经济性进行了详细分析，并归纳了它的优质、高速、高效、低成本的优点，阐明了它在船厂钢板下料中的应用前景．     

新型AMB-5型潜水电动机

由俄罗斯<电力>股份公司研制并申请了专利的近十种系列开式无污染潜水电动机可工作于无限海水深度.其内部有效部件包括轴承和绕组,是由舷外海水直接冷却的.     

金杯JM491Q-E型发动机微机控制系统

介绍沈阳金杯JM491Q-E型发动机微机控制系统，并对其各项控制电路进行简单说明。     

利用孔压静探确定软土地基的强度

将孔压探头贯入近似为孔穴扩张的过程，通过对探头的受力分析，得到了由孔压静探确定的饱和软粘土的不排水剪切强度值，采用此方法对广东西部沿海高速公路二标段软土地基的强度进行了估算，并与十字板试验的测试值作了对比，验证了方法的可行性。     

豪华型巨无霸潜水游艇

国际游艇设施委员会(ICOMIA)提供的数据表明,欧美等全球发达国家每171人就拥有一艘游艇。其中挪威、新西兰等国家的人均游艇拥有量是8:1;美国为4:1。目前全世界游艇年消费量高达400亿美元;如果再加上相关的维修保养、经营管理、租赁娱乐等服务费用在内,全球年均游艇经济收入在500亿美元以上。在目前的世界船舶市场上,游艇市场异军突起, 仅仅游艇一项的年均销售额高达2 000多亿美     

医用分子筛制氧设备

医用分子筛制氧设备是一种用于医疗保健的医用制氧设备，具有操作方便，体积小，噪音低，氧气成本低等特点。本产品通过了河北省的技术鉴定，拥有河北省食品药品监督管理局颁发的生产许可证和产品注册证，现己批量生产，深得用户好评。