制备和检测胚胎显微操作用针的实用方法体系

目的介绍一种优化的制备及检测胚胎显微操作用针的实用方法体系。方法移卵管制作是用普通毛细管在酒精灯上拉制,小砂轮断针,针口用酒精灯火焰稍处理后备用;持卵针是将外径1.0mm的毛胚管在拉针仪上拉制,小砂轮断针,烧针仪上将开口处理成平滑内陷的马蹄形;注射针是将带内芯的外径1.0mm的特制毛胚管在拉针仪上拉制而成。注射针尖端充满注射溶液后,将注射针和持卵针连接到显微操作系统的操作臂上,先置于胚胎培养液内,用针尖轻轻碰触持卵针以破坏开口。之后转移到矿物油里,加压试注射,根据注射针开口液滴流出速度判断针尖是否通畅,流速是否合适。进一步用受精卵试注射进行验证。结果通过本方法体系制备的移卵管、持卵针和注射针均达到胚胎显微操作要求,解决了注射针口液体流速难以判断的问题。结论该胚胎显微操作用针的制备与检测方法体系使胚胎显微注射的前期工作得以标准化,提高了后续胚胎显微注射的效率。     

干细胞与药物安全

科学家们成功将人类胚胎干细胞进行培养，并用生物高聚的细胞进行连接，这有望给临床前使用药毒性研究带来一场伟大的革新。这项技术的风险降到最低，并为临床研究带来极大益处。由于干细胞培养领域的技术不断进步，人们甚至可以在药物临床前实验开展之前，就用人类细胞甚至器官进行实验来验证药物的治疗效果。     

清热益气通络方治疗糖尿病肾病大鼠蛋白尿的实验研究

目的探讨清热益气通络方治疗糖尿病肾病(DN)大鼠蛋白尿的机制。方法 37只采用单侧肾切除腹腔注射链脲佐菌素的方法建立的糖尿病肾病大鼠模型分为3组:模型组、中药组和厄贝沙坦组,另设正常对照组。连续治疗12周后,检测24h微量白蛋白(umAlb)、24h尿蛋白量(UPro)、内生肌酐清除率(Ccr)。免疫荧光双标记足细胞表面特异性蛋白(podocalyxin)、结蛋白(desmin),荧光标记足细胞肾胚胎瘤抑制基因(wilms tumor 1,WT1)计数足细胞数及密度。光镜及电镜观察肾小球结构。结果与对照组比,模型组大鼠BW/KW、24hUPro、24humAlb、Ccr及desmin吸光度显著增高(P<0.01或P<0.05),podocalyxin吸光度及足细胞密度显著降低(P<0.01);清热益气通络方及厄贝沙坦能改善DN大鼠以上指标,与模型组比有统计学差异(P<0.01或P<0.05);清热益气通络方降低24hUPro及上调podocalyxin表达的作用优于厄贝沙坦(P<0.05)。结论清热益气通络方药能降低DN尿蛋白的排泄,其作用机制可能与拮抗podocalyxin、desmin蛋白在足细胞的异常表达、一定程度抑制DN足细胞上皮-间充质转分化有关。     

人类胚胎干细胞可制人造血

英国科学家正计划利用人类胚胎干细胞制造血液。这种人造血液可以在紧急情况下用来替病人输血。如果成功的话，这项全球首创的技术相信可以救活很多生命。     

人体组织酸性磷酸酶表型研究

采用快速超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术（ＵＬＰＡＧＩＦ），分析了４２例胚胎组织及其绒毛组织中酸性磷酸酶（ＡＣＰ）表型，同时调查了西安汉族群体ＡＣＰ表型分布，并对室温及４℃保存血痕中ＡＣＰ表型检出时限进行研究。结果证明：胚胎组织中ＡＣＰ具有遗传多态性，与绒毛组织中ＡＣＰ表型一致；西安汉族群体ＡＣＰ基因频率：Ｐａ０．２１３，Ｐｂ０．７８７，个体识别率ＤＰ０．５０，非父排除率Ｐ０．１３９５：室温保存血痕ＡＣＰ活性持续到第９周，４℃保存血痕检测到第１４周全部能正确判型，这对血痕检材个人识别具有现实意义。     

EB1基因表达与胚胎染色体数目异常的关系

目的研究EB1基因在胚胎绒毛细胞中的表达,并分析其对染色体分离的影响。方法采用荧光定量PCR技术检测EB1基因在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞和自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达差异;免疫组织化学方法检测EB1蛋白在两者中的表达情况,并用Western blot加以验证。结果EB1基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中为0.010 04±0.008 223,在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中为0.150 9±0.063 3。Western blot和免疫组织化学结果表明其在自然流产绒毛核型分析异常胚胎细胞中的表达也高于其在人工流产绒毛核型分析正常胚胎细胞中的表达。经统计分析,EB1基因mRNA水平和蛋白水平在上述两组细胞中的表达均有显著差异。结论EB1基因在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达明显高于其在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中的表达,其高表达可能导致染色体分离异常。     

电针对脊髓损伤大鼠星形胶质细胞的影响及机制

目的 观察电针治疗脊髓损伤大鼠的行为功能及脊髓损伤部位胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和阶段性特异性胚胎抗原-1 (SSEA-I)的表达,阐明电针对脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生及分化的影响及其机制.方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针治疗组,每组20只.分别于脊髓损伤造模后第3、7、14、28天时进行BBB评分(Basso-Beaie-Bresnehan scale),并用免疫组化方法检测大鼠脊髓损伤部位GFAP和SSEA-1变化并与对照组比较.结果 电针组与模型组在3d和7d时,GFAP和SSEA-1阳性细胞数有差异(P＜0.01),7d时阳性细胞数达到峰值,在14d时电针组和模型组的阳性细胞数有差异(P＜0.05),而在28 d时,电针组和模型组GFAP阳性细胞无明显差异(P＞0.05),但SSEA 1阳性细胞有统计学差异(P＜0.05).结论 电针治疗能够增加脊髓损伤模型大鼠星形胶质细胞逆分化,激发星形胶质细胞的干细胞潜能,从而促进损伤后脊髓功能的恢复;损伤后的脊髓GFAP和SSEA-1阳性表达的高峰期都在7d,提示脊髓损伤后7d内可能为电针治疗介入的黄金期.     

人胎脑额叶和海马中星形胶质细胞的发育性变化

目的探讨人类胚胎期大脑额叶、脑室区(ventricular zone,VZ)/脑室下区(subventricular zone,SVZ)以及海马内星形胶质细胞的分布规律及形态特征。方法将收集的引产胎儿按胎龄分为4组:9¹1周,1411周,14¹6周,2216周,22²4周和3224周和32³6周。切取额叶、VZ/SVZ和海马部位的脑组织,固定后制作冰冻切片,免疫组织化学染色后观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的分布及形态。通过GFAP和nestin免疫荧光双标染色剔除GFAP阳性的神经干细胞。结果 1在皮质,936周。切取额叶、VZ/SVZ和海马部位的脑组织,固定后制作冰冻切片,免疫组织化学染色后观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的分布及形态。通过GFAP和nestin免疫荧光双标染色剔除GFAP阳性的神经干细胞。结果 1在皮质,9¹1周时GFAP阳性细胞主要位于VZ、SVZ和中间带(intermediate zone,IZ)内;1411周时GFAP阳性细胞主要位于VZ、SVZ和中间带(intermediate zone,IZ)内;14¹6周时其位于VZ最内层、IZ和分子层(marginal zone,MZ)内;2216周时其位于VZ最内层、IZ和分子层(marginal zone,MZ)内;22²4周时皮层、髓质、IZ、SVZ和VZ最内层均有GFAP阳性细胞,髓质中的GFAP阳性细胞免疫反应强烈,胞体浓染,突起围绕胞体向四周伸展,具有典型纤维型星形胶质细胞的特征;3224周时皮层、髓质、IZ、SVZ和VZ最内层均有GFAP阳性细胞,髓质中的GFAP阳性细胞免疫反应强烈,胞体浓染,突起围绕胞体向四周伸展,具有典型纤维型星形胶质细胞的特征;32³6周时GFAP阳性细胞的分布模式类似于2236周时GFAP阳性细胞的分布模式类似于22²4周,髓质中的阳性细胞数量增加。2在海马,924周,髓质中的阳性细胞数量增加。2在海马,9¹6周期间GFAP免疫反应程度较弱,主要分布在海马伞、VZ和MZ;22周后GFAP免疫反应程度增强,数量增多,分布范围逐渐扩大。3实验各组额叶VZ、SVZ以及海马的海马伞、VZ均有GFAP和nestin免疫荧光双标阳性细胞存在。结论在人胚胎发育后期端脑星形胶质出现并逐渐增多、分布广泛并趋于成熟。     

不同胚龄昆明小鼠胚胎获取胚胎干细胞体外培养的比较

目的 探讨分离培养昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的最佳胚龄.方法 分别从孕3.5 d和4.5 d的母鼠子宫中分离收集桑椹胚和囊胚.比较体外培养时胚胎的贴壁率、内细胞团(inner cell mass,ICM)形成率、形成ES细胞克隆率(P1)和形成ES细胞亚克隆率(P2).结果 孕3.5 d采集的胚胎多为桑椹胚,孕4.5 d采集的胚胎多为囊胚,分离培养结果表明.后者的胚胎贴壁率、ICM形成率和ES细胞克隆形成率均高于前者,均有显著性差异(P<0.05).结论 囊胚较桑葚胚更适合作为体外分离培养昆明小鼠ES细胞的材料.     

脑波促使运动神经元生长

美国威斯康星大学麦迪逊分校研究人员首次通过人类胚胎干细胞培养出了脊髓运动神经元。这一进步使得研究人员可以为神经系统活动筛选新药物建立运动神经元模型系统。