海洋真菌抗表皮葡萄球菌抗生素的初步研究

从海藻和海绵表面或组织内分离筛选出五株具有抑制表皮葡萄球菌活性的海洋真菌,分别鉴定为木霉属、光孢青霉、曲霉属、尖孢镰刀霉和交链格孢霉.经单剂量法测定其每毫升发酵液抑制表皮葡萄球菌的效价分别相当于氨苄青霉素0.8单位、1.1单位、22.5单位、7.9单位和6.2单位.高效液相色谱分析显示这五株真菌的代谢产物具有较显著差异,抗菌活性生物自显影表明这些菌株的抗表皮葡萄球菌抗生素成分也呈现较高的多样性.化学显色试验表明其中一株曲霉菌DLEP2008001的最强活性成分可能为含有仲胺及羧基基团的甾体或三萜类化合物,而次强活性成分可能为含有仲胺基团的化合物.研究结果表明,作为抗表皮葡萄球菌后备药物的潜在来源,海洋真菌值得深入研究.     

污水中分离的大肠杆菌噬菌体和金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性分析

目的 以污水中分离的大肠杆菌噬菌体(Escherichia coli phage, ECP)和金黄色葡萄球菌噬菌体(Staphylococcus aureus phage, SAP)作为研究对象,初步分析其生物学特性,为研究噬菌体应用提供新的实验材料。方法 采用双层琼脂法纯化ECP和SAP,利用扫描电镜观察形态特征,通过最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)实验、一步生长曲线实验、温度、pH、氯仿及紫外线敏感性实验进行生物学特性分析。结果 根据形态将两种噬菌体归为肌尾噬菌体科,最佳MOI均为10^-1,均对紫外线具有较强的抵抗力。ECP和SAP的潜伏期分别为20 min和10 min,子代噬菌体裂解量分别为76.3 PFU/cell和8.3 PFU/cell。ECP对温度耐受范围较宽,能在30～50℃稳定存活,而SAP对温度较敏感,在50℃的条件下,作用1 h,即可完全失活;ECP在pH为5～11的范围内,SAP在pH为6～9的范围内维持较好的裂解活性;ECP对氯仿具有较强的耐受性,为无囊膜型噬菌体,而SAP对氯仿较敏感,为囊膜...     

葡萄球菌的耐药性分析

目的研究医院内葡萄球菌属细菌的耐药状况,为临床合理、有效地使用抗生素提供依据。方法用K-B法对采集的咽拭子标本中分离到的葡萄球菌进行药敏试验,采用双重PCR方法检测葡萄球菌的FemA及MecA基因。FemA和MecA基因均为阳性者为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)菌株,仅MecA基因阳性者为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(methicillin-resistant coagulase-negative Staphylococci,MRCNS)。结果从采集的361份标本中,分离出葡萄球菌220株,其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)110株。住院患者、医护人员葡萄球菌标本中凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci,CNS)分别占84/151(55.63%)、13/25(52.00%),均高于正常人群的13/44(29.55%)(P<0.05);住院患者中的耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus,MRS)对除万古霉素外的常用抗生素均有明显的耐药性。住院患者分离的67株SA中检测到MRSA菌株31株(46.27%);84株CNS中检测到MRCNS菌株26株(30.95%)。结论住院患者标本中的葡萄球菌对常用抗生素均有明显的耐药性,且CNS的比例显著高于正常人群;其中MRS几乎对所有抗生素都表现为耐药,表明MRS已成为医院内感染的重要致病菌。用双重PCR方法检测MRSA,比药敏试验简单,且快速、准确、敏感、特异性强,具有很好的临床应用价值。     

海洋真菌抗表皮葡萄球菌抗生素的初步研究

从海藻和海绵表面或组织内分离筛选出五株具有抑制表皮葡萄球菌活性的海洋真菌,分别鉴定为木霉属、光孢青霉、曲霉属、尖孢镰刀霉和交链格孢霉.经单剂量法测定其每毫升发酵液抑制表皮葡萄球菌的效价分别相当于氨苄青霉素0.8单位、1.1单位、22.5单位、7.9单位和6.2单位.高效液相色谱分析显示这五株真菌的代谢产物具有较显著差异,抗菌活性生物自显影表明这些菌株的抗表皮葡萄球菌抗生素成分也呈现较高的多样性.化学显色试验表明其中一株曲霉菌DLEP2008001的最强活性成分可能为含有仲胺及羧基基团的甾体或三萜类化合物,而次强活性成分可能为含有仲胺基团的化合物.研究结果表明,作为抗表皮葡萄球菌后备药物的潜在来源,海洋真菌值得深入研究.     

表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS对相关蛋白调控的研究

目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPlatinum软件分析;免疫印迹法验证saeRS调控的差异蛋白。结果在表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株蛋白质图谱中共发现23个差异表达的蛋白点(10个下调,13个上调)。结论蛋白质双向电泳技术可以成功应用于分析表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS的调控网络;此图谱为进一步研究saeRS在表皮葡萄球菌中的调控机制奠定了基础。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究

目的 探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法,了解医院内MRSA的多态性,为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助.方法 用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法,对MRSA菌株进行多态性分析.HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度,根据DRUs数目的 不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置,经NTSYS统计软件进行聚类分析,得到遗传树状图,按MRSA菌株之间的相关性进行分型.结果 应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型,分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs,其中10DRUs型最多[11/31(35.48%)],16DRUs型最少[1/31(3.23%)];应用RAPD分型,31株MRSA共分10型,其中以Ⅳ型为主[10/31(32.26%)],其他型分布比较接近.在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPD Ⅳ型4株[4/11(36.36%)],RAPD Ⅲ型和RAPD Ⅳ型各2株[2/11(18.18%)];10株RAPD Ⅳ型中9DRUs型、10DRUs型各4株[4/10(40.00%)].结论 RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高,而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速,实用性强,具有广阔的应用前景.     

真菌密度感应分子Farnesol在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用

目的探讨真菌密度感应分子Farnesol在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用。方法将表皮葡萄球菌标准株ATCC35984及白假丝酵母菌标准株ATCC10231混合培养建立体外生物膜模型,加入Farnesol或不加入Farnesol分为Farnesol处理组和对照组,孵育2、4、6、8、12、24、48、72、96h时用结晶紫染色法半定量检测生物膜形成能力;二甲氧唑黄(XTT)比色法评价生物膜的体外生长动力学;扫描电子显微镜观察生物膜超微结构;荧光定量PCR分析各组生物膜形成相关基因的表达情况。结果结晶紫染色法生物膜半定量检测显示,12、24hFarnesol处理组和对照组差异有统计学意义(P<0.05)。XTT比色法生长动力学检测显示,Farnesol处理组在4、48h与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜结果显示,对照组混合生物膜结构较Farnesol处理组致密复杂。荧光定量PCR结果显示,培养6hFarnesol处理组表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因icaA、fbe、aap基因及白假丝酵母菌生物膜形成相关基因als3、hwp1、efg1基因的表达下调;培养24hFarnesol处理组表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因aap基因及白假丝酵母菌生物膜形成相关基因als3、hwp1、efg1基因的表达下调。结论在真菌密度感应分子Farnesol的干预下,对照组形成的混合生物膜较Farnesol处理组结构更为致密及复杂,这种结构的改变可能与Farnesol处理组白假丝酵母菌生物膜形成相关基因als3、hwp1、efg1基因的表达下调相关性更密切。     

蒜氨酸、蒜酶及二者联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用

目的了解蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性。方法采用液体稀释法、平板计数法检测蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对10株临床分离的MRSA体外抗菌活性,并采用菌落法绘制时间-杀伤曲线。结果蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均对MRSA有抗菌活性,而蒜酶无作用。结论蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均为对MRSA敏感的抗菌药物,有望用于治疗由MRSA引起的感染性疾病。     

头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析

目的对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价,并分析头孢西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况,以指导临床合理用药。方法临床分离葡萄球菌310株,以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准,按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(K-B法)药敏试验检测MRS,同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌198株,凝固酶阴性葡萄球菌112株,经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112);头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%;除复方新诺明和万古霉素外,MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测MRS的常规方法;MRS的感染发生率及耐药性较高,且对各类抗生素多重耐药,需加强其耐药性监测。