赤木文库藏琉球官话课本《广应官话》中三则清代闽琉交流史料考述

赤木文库本《广应官话》中保留了三则清代闽琉交流史料,一则是见于《历代宝案》的闽县林合兴商船杠椇清册,属于雍正十年(1732)中琉海难救助史料;另一则是雍乾时期闽中进士刘敬与和琉球人的友好交往记录;最后一则是闽地流行的《新刻官话汇解释义音注》等官话正音书的引文,属于乾嘉时期闽琉文化交流的史料。这些史料一方面说明琉球官话课本语料来源的复杂性,另一方面也体现出其在闽琉交流史研究中的特殊性。     

Screening of hepatocyte proteins binding to NS5ABP37 protein by yeast-two hybrid system

Objective To investigate the biological function of NS5ABP37 and to look for proteins interacting with NS5ABP37 protein in hepatocytes. Methods We constructed bait plasmid expressing NS5ABP37 protein of hepatitis C virus (HCV) by cloning the gene of NS5ABP37 protein into pGBKT7, then the recombinant plasmid DNA was transformed into yeast AH109 (α type). The transformed yeast AH109 was mated with yeast Y187 (α type) containing liver cDNA library plasmid in 2×YPDA medium. Diploid yeast was plated on synthetic dropout nutrient medium (SD/-Trp-Leu-His-Ade) containing X-α-gal for selection and screening. After extracting and sequencing of plasmids from positive (blue) colonies, we made a sequence analysis by bioinformatics. Results We screened twenty-five proteins binding to NS5ABP37, including Homo sapiens cyclin Ⅰ (CCNI) gene, Homo sapiens matrix metallopeptidase 25 (MMP25) and Homo sapiens talin 1. Conclusion The yeast-two hybrid system is an effective method for identifying hepatocyte proteins interacting with NS5ABP37 of HCV. And the biological function of NS5ABP37 may be associated with glycometabolism, lipid metabolism and apoptosis.     

K562细胞cDNA表达文库的构建和鉴定

目的　构建K5 6 2细胞表达型cDNA文库。方法　提取K5 6 2细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5’端 ,Sephacryl S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与去磷酸化的λgt11噬菌体连接 ,体外包装后建成cDNA文库。取出 1μL倍比稀释感染E .coliY10 90 ,测定文库大小、重组率 ,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果　构建成含 1.0 2× 10 6重组子的K5 6 2细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.3kb。结论　所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。     

靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选

目的构建V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与Vsig4蛋白结合的噬菌体,经测序和基因比对所得VHH序列,用ELISA法筛选出抗Vsig4的高亲和力纳米抗体,并用Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库,经过克隆筛选获得136个Vsig4阳性单克隆,经测序获得15个不同的VHH基因,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的Vsig4纳米抗体,其中Nb119的亲和力最高,并且可以与Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的Vsig4纳米抗体,以期用于检测巨噬细胞表面Vsig4的表达和构建特异性分子探针。     

历险十八年 护宝志弥坚(三)——记中共中央秘密档案库

1927年蒋介石发动"四一二"反革命政变后,上海陷于一片白色恐怖之中,先是国民党反动派,后是日本帝国主义侵略者的军警宪特疯狂搜捕杀戮共产党人和革命志士,仅1927年4月至1928年6月一年余被屠杀的共产党员和革命群众就多达33万余人。然而,在这腥风血雨的上海滩上,居然深藏有中共中央两座秘密档案库和四万余份党的重要文件。这是中国共产党秘密斗争战线上的一个惊人的奇迹。而这个鲜为人知的奇迹是在周恩来、瞿秋白亲切关怀下,由一大批优秀共产党员和他们的家属舍生忘死共同奋斗而创造的。     

宏基因组学及其技术的研究进展

宏基因组学是研究生态群体基因功能和其相互作用的新科学领域,以特定生态环境中微小生物遗传物质的总和作为研究对象,基本研究策略是通过克隆、异源表达,筛选出有用的新基因及其产物。宏基因组学为生命学科和药学研究提供了一个强有力的新技术,并在包括医学在内的许多领域取得了新成就。本述评对宏基因组学的概念、技术和应用作了简要介绍。     

SH—SY5Y细胞基因片段文库及数据库的建立

目的：建立SH-SY5Y细胞基因片段文库和一种对大量cDNA片段数据管理系统的方法。方法：采用RD-PCR技术构建SH-SY5Y细胞基因片段文库，并对每一个克隆进行测序。应用FOXPRO编制一个软件对其大量的信息进行系统化管理。结果：应用RD-PCR技术建立了细胞的cDNA片段文库，由1200余个片段克隆组成；应用FOXPRO制作了基因片段数据信息管理系统的软件，对此文库片段的测序数据进行管理。结论：采用RD-PCR技术是一个很好的建立基因片段文库的方法；建立了基因片段数据信息管理系统的软件进行这个文库数据的管理。     

自人脑胶质瘤cDNA文库克隆与鼠SH2—B同源基因片段

自人脑胶质瘤文库克隆新的表达序列标签。方法以人脑胶质瘤文库为模板,利用生长休止特异基因的５’特异引物与载体特异引物组合进行ＰＣＲ扩增,对目的片段进一步克隆,测序。结果扩增出一个３２８ｂｐ的片段,同源性分析发现该片段与鼠ＳＨ２－Ｂ有８６％的同源性。