香菇多糖对培养肝癌细胞索拉非尼耐药的逆转作用及机制

目的 初步探讨香菇多糖对索拉非尼(Sorafenib)耐药肝癌细胞BEL-7402/S的作用及机制.方法 CCK-8法检测香菇多糖、索拉非尼对BEL-7402和BEL-7402/S细胞的增殖-毒性作用,以及香菇多糖对索拉非尼的耐药逆转倍数;RT-qPCR及Western blotting法检测香菇多糖对BEL-7402...     

HBV Pre S1蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能

为探讨应用双杂交体系统克隆与HBVPreS1蛋白质结合的肝细胞受体的可行性，我们构建了HBVPreS1蛋白质与酵母GAL4DNAbindingdomain融合蛋白质酵母表达质粒。通过应用该质粒转化酵母菌株SFY526，检测报道基因产物五半乳糖苷酶活性，结果表明HBVPreS1蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能。能否去除PreS1蛋白质转录激活功能区域但却保留其与肝细胞受体的结合区域用于酵母双杂交体系统筛选肝细胞cDNA文库、克隆与PreS1蛋白质结合的肝细胞受体尚需进一步实验探讨。     

补硒对克山病病区低硒居民血清锌、铜、铁、锰、钙和镁的影响

目的　探讨补硒对克山病病区居民有关元素水平的影响。方法　给克山病病区 1 3～ 1 5岁居民每日口服硒酵母或亚硒酸钠 2 0 0 μg或普通酵母片 1 2周后 ,测定其血清和红细胞硒含量以及血清锌、铜、铁、锰、钙和镁含量。结果　给病区低硒居民补充亚硒酸钠和硒酵母均能明显提高血浆和红细胞硒水平 ,但硒酵母提高血浆和红细胞硒水平作用强于亚硒酸钠 ;补充亚硒酸钠或硒酵母均对病区居民血清锌、铜、铁、锰、钙和镁含量无明显影响。结论　补硒可明显提高病区居民血硒水平 ,但硒水平并不影响血清锌、铜、铁、锰、钙和镁元素的含量     

酵母双杂交技术筛选人PIF1解螺旋酶相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交技术研究筛选与人类PIF1解螺旋酶相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交技术,以人PIF1蛋白PINT功能域(1¹80氨基酸)和解螺旋酶模序(167180氨基酸)和解螺旋酶模序(167⁹26氨基酸)为诱饵,与HeLa细胞cDNA文库杂交,筛选能与人PIF1蛋白不同功能域相互作用的蛋白。结合生物信息学分析,一对一酵母回复性杂交及β-galactosidase实验等确定阳性克隆。结果 PIF1蛋白PINT功能域杂交共获得17个阳性克隆,生物信息学分析有3个阳性基因,它们分别是CCNDBP1、OTUD5、CAP1。而PIF1蛋白解螺旋酶模序未获得阳性克隆。结论 PIF1蛋白的PINT功能域对调控PIF1的生理功能具有非常重要的作用。     

百合多糖的分离纯化及抗肿瘤作用

目的 从百合粗多糖中分离纯化出纯化的百合多糖,并观察其抗肿瘤作用.方法 用水提醇沉法从植物百合中提取百合粗多糖,经透析、除蛋白、冷冻干燥后,采用DEAE-阴离子交换纤维素分段洗脱对其进行分离纯化,得到纯化的百合多糖;将纯化的百合多糖用于H22荷瘤小鼠,测定其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用.结果 分离出了纯化的百合多糖,经纯度鉴定表明成分均一;该多糖能增强H22荷瘤小鼠的免疫功能,抑制H22肿瘤的生长.结论 纯化的百合多糖成分均一,具有抗肿瘤作用.     

大黄素和黄芪多糖对实验性肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响

目的 探讨大黄素和黄芪多糖单用及联合应用对肝损伤大鼠肝脏超微结构的影响及意义.方法 采用四氯化碳(CCl4)等复合因素诱导大鼠肝损伤模型.选取清洁雄性SD大鼠90只,随机分为6组:正常对照组(10只)、模型组(20只)、大黄素组(15只)、黄芪多糖组(15只)、大黄素和黄芪多糖联合给药组(15只)、秋水仙碱组(15只).除正常对照组和单纯造模组外其他各组同时给对应的药物干预,即大黄素40mg/(kg·d)、黄芪多糖200mg/(kg·d)、大黄素40mg/(kg·d)+黄芪多糖200mg/(kg·d)、秋水仙碱0.1mg/(kg·d),共12周.采集标本后测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,电镜观察各组大鼠肝脏的超微结构.结果 大黄素、黄芪多糖单用或联合应用均可以减轻CCl4对大鼠肝脏组织的损伤程度,尤其是联合用药可以明显减少肝组织Hyp含量;保护肝脏的超微结构改变,表现为肝细胞结构接近正常,包膜规整,细胞质内见少量脂滴,线粒体嵴排列规整,内质网增生且明显扩张,肝窦隙可见呈梭形或杆状的肝星状细胞(HSC),肝窦内充斥少量纤细胶原纤维束,Kupffer细胞脂滴不多.结论 大黄素和黄芪多糖对CCl4致大鼠肝脏的超微结构损伤具有一定的预防保护作用.     

Screening of hepatocyte proteins binding to NS5ABP37 protein by yeast-two hybrid system

Objective To investigate the biological function of NS5ABP37 and to look for proteins interacting with NS5ABP37 protein in hepatocytes. Methods We constructed bait plasmid expressing NS5ABP37 protein of hepatitis C virus (HCV) by cloning the gene of NS5ABP37 protein into pGBKT7, then the recombinant plasmid DNA was transformed into yeast AH109 (α type). The transformed yeast AH109 was mated with yeast Y187 (α type) containing liver cDNA library plasmid in 2×YPDA medium. Diploid yeast was plated on synthetic dropout nutrient medium (SD/-Trp-Leu-His-Ade) containing X-α-gal for selection and screening. After extracting and sequencing of plasmids from positive (blue) colonies, we made a sequence analysis by bioinformatics. Results We screened twenty-five proteins binding to NS5ABP37, including Homo sapiens cyclin Ⅰ (CCNI) gene, Homo sapiens matrix metallopeptidase 25 (MMP25) and Homo sapiens talin 1. Conclusion The yeast-two hybrid system is an effective method for identifying hepatocyte proteins interacting with NS5ABP37 of HCV. And the biological function of NS5ABP37 may be associated with glycometabolism, lipid metabolism and apoptosis.     

Legg-Perthes病关节软骨功能状态改变及其影响

目的　评价Legg Perthes病早期关节软骨功能状态及其对该病发展的影响。 方法　选择健康杂种幼犬 2 0只 ,雌雄不限 ,采用自身对照方法 ,任选一侧髋为实验侧 ,另一侧作为对照。应用TH胶股骨颈内注射法制作Legg Perthes病动物模型 ,于注胶后 8周、1 2周时幼犬分批处死取材 ,观察组织学变化 ,行软骨基质及软骨下骨蛋白多糖 (Proteoglycan ,PG)和碱性磷酸酶 (Al kalinephosphatase ,AKP)测定。 结果　随着实验时间延长 ,关节软骨病变与骨骺坏死病变逐渐加重 ,实验侧关节软骨增厚 ,早期即可观察到软骨细胞分布较稀散 ,软骨深层空缺软骨陷窝明显增多 ,软骨基质及软骨下骨PG含量显著下降 ,软骨下骨AKP活性明显降低。结论　Legg Perthes病时关节软骨功能早期已有明显障碍 ,其与股骨头骨骺坏死病变可相互促进 ,互相影响     

大黄素和黄芪多糖对大鼠实验性肝癌的抑制作用

目的研究大黄素与黄芪多糖对大鼠实验性肝癌的抑制作用并探讨其机制。方法采用二乙基亚硝胺(dieth-ylnitrosamine,DEN)诱发大鼠肝癌模型。50只清洁级雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组、肝癌模型组(DEN诱癌)、大黄素组(诱癌同时给大黄素)、黄芪多糖组(诱癌同时给黄芪多糖)、大黄素和黄芪多糖联合给药组(诱癌同时联合用大黄素和黄芪多糖干预),每组10只。联合灌胃14周。实验第18周处死所有大鼠,检测血清ALT、ALP、γ-GT和AFU,并行肝脏病理检查,用SABC法检测谷胱甘肽-S-转移酶(GST-P)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况。结果造模各组大鼠的ALT、ALP、-γGT、AFU均明显升高(P<0.05),两种药物干预可以减轻肝脏损害(P<0.05)。病理检查证实各实验组大鼠均诱发出肝癌。两种药物均能减少GST-P和TGF-β1的表达(P<0.05),但联合应用未显示明显的协同作用。结论大黄素、黄芪多糖干预治疗可以减轻肝损害,降低肝癌标志物GST-P的表达。抑癌作用可能与这两种药物抑制了肝癌组织TGF-β1的表达有关。     

鸡白细胞介素2在毕赤酵母细胞中的表达

目的　利用Pichia酵母真核细胞表达系统表达重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 ) ,为大量制备鸡IL 2奠定基础。方法　将ConA激活的鸡脾脏T淋巴细胞中扩增得到的我国地方品种萧山鸡IL 2基因 ,克隆入pPIC9载体中构建重组质粒。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115感受态细胞 ,甲醇诱导蛋白质表达。结果　SDS PAGE和Westernblot均在 30ku处检测到特异条带。结论　表明重组鸡IL 2基因在毕赤酵母GS115中获得表达