芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

750发动机异型油盘和大流量油泵介绍

国内不少摩托车迷在750边三轮及发动机上做了不少改进,但大多是针对其点火系统做的改良,虽取得了一定的成效,却无法使发动机性能明显改观。十余年来,我们与美国客商及国内零部件制造商合作,致力于750发动机的性能改进和整车外观及舒适性改良,已在发动机性能改进方面取得     

空气流量传感器损坏故障

故障现象: 一辆红旗CA7220E轿车,行驶中突然出现间断熄火现象,继而完全熄火.通过对该车的检查发现,该车能迅速起动,只是起动后无论踩油门或松油门均很快就熄火,但此时仪表盘上的故障报警灯却不闪烁报警.用V.A.G1551故障诊断仪检查,故障诊断仪显示无故障码.     

用皮托管测量牵引电机冷却风机风量

对270km/h高速列车牵引电机冷却风机皮托管流量测量方法进行了研究，通过地面标定实验得到了皮托管动压与风机流量的关系，研究结果表明，皮托管流量测量法可用于实时检测列车运行过程中风机冷却风量。     

利用孔压静探确定软土地基的强度

将孔压探头贯入近似为孔穴扩张的过程，通过对探头的受力分析，得到了由孔压静探确定的饱和软粘土的不排水剪切强度值，采用此方法对广东西部沿海高速公路二标段软土地基的强度进行了估算，并与十字板试验的测试值作了对比，验证了方法的可行性。     

ТЗМ7А型内燃机车电机冷却用空气流量的调节

介绍了柳迪诺沃内燃机车制造厂为调节内燃机车牵引电机冷却空气流量而制定的两种方法，并通过试验对两种方法进行了比较，文中附有集中供风系统通风机所需功率和效率与风量的关系曲线以及通风机全压与其风量的关系曲线。     

三峡水利枢纽最小下泄流量及其对航道影响的初步研究

运用数理统计方法，按三峡水库调度方式，对宜昌站实测资料进行统计分析研究，提出对水库优化调度方案的最小下泄流量要求以及可能产生的碍航问题。