胃癌细胞株SGC—790l及MGC—803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定

目的 探讨胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中survivin基因转录与表达情况，为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法 ①利用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度。结果 从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出612bp的DNA片段，与预期的扩增片段大小相符；序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致；免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物。结论 中国人胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中均存在survivin基因的mRNA转录及蛋白的高表达。     

K562／A02细胞株核因子-KB活性与P糖蛋白的表达

目的 探讨K562／A02细胞株NF-kB活性与P—gP表达的关系。方法 在K562／A02白血病耐药细胞株培养中加入NF-kB抑制剂PDTC，观察在不同浓度、不同时间下，细胞株NF-kB活性的变化与P—gP表达的关系。结果在不同浓度、不同时间的PDTC作用下，K562／A02细胞株NF-kB活性与P—gP表达呈正相关的关系，随干预浓度、时间的不断变化，二者均逐渐下降。结论 NF-kB调控的白血病细胞抗凋亡机制中有MDR1的参与。     

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。     

人膀胱移行细胞癌细胞株BLZ-211的生物学特性

以膀胱移行细胞癌患者的肿瘤标本为材料建立了１株克隆性膀胱癌细胞株ＢＬＺ－２１１,体外培养３年多,传代１５０次,没有支原体污染。生物学特性鉴定：光镜和超微结构显示该细胞具有膀胱移行细胞癌细胞特征。细胞接种裸鼠形成的移植肿瘤与手术标本病理形态一致。染色体众数６３,有特异性的ＬＤＨ同功酶谱,有ｐ１６基因的正常扩增条带。结果提示ＢＬＺ－２１１细胞株是一个研究人膀胱移行细胞癌细胞生物学的实用模型。     

小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞对光动力治疗敏感性的研究

目的 探讨小剂量顺铂增加入宫颈癌Hela和Siha细胞系对光动力治疗的敏感性及细胞凋亡的机理.方法 将Hela和Siha细胞分为空白对照组、单纯光动力治疗组、单纯顺铂治疗组和光动力加顺铂治疗组,MTT法检测各组入宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖情况.采用免疫细胞化学法检测各组Hela和Siha细胞受作用后P185c-erbB-2蛋白的表达情况.结果 顺铂和光动力治疗联合应用导致细胞凋亡的程度均明显强于单一顺铂作用或光动力作用,细胞中P185c-exbB-2蛋白的表达下降程度也与之相一致.但是先顺铂后光动力治疗和先光动力治疗后顺铂相比,作用效果差异不明显.结论 顺铂和光动力联合治疗在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞有明显增殖抑制作用,强于单独一种方法治疗,其机理可能与抑制P185c-erbB-2表达有关.     

热疗对膀胱癌细胞BIU-87/HCPT耐药相关基因的影响

目的观察热疗对耐羟基喜树碱膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法不同温度条件下热疗、化疗、热疗联合化疗处理耐药膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽硫-转移酶π(GST-π)和survivin表达的变化。结果热疗对BIU-87/HCPT细胞具有抑制作用,呈温度依赖性且在43℃时最强。热疗可显著增加羟基喜树碱对BIU-87/HCPT细胞的抑制率,作用呈温度依赖性,热疗明显增加化疗的作用。热疗联合化疗明显减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达并呈温度依赖性。结论热疗可促进膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT凋亡,增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达。     

pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表达质粒的构建及其在MCF-7乳腺癌细胞株中的表达

目的明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达。方法 RT-PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况;Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况。设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒。挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定。瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况。结果①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达;②pcD-NA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好。结论成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定。     

益气养血保元方中微量元素对肝癌细胞的影响

本实验通过益气养血保元方(OQP)对肝癌SMMC-7721细胞的作用,看到OQP可抑制肝癌细胞~3H-TdR和~(14)C-UR的掺入率,二者间有随OQP剂量增大而抑制率升高的剂量效应关系,提示OQP影响了肝癌SMMC-7721细胞的DNA、RNA合成,直接影响了癌细胞的生长分化,这些作用,可能是通过OQP中低Cu/Zn比值,高硒含量而达到的。临床证实OQP可改善中、晚期肝癌病人一般状况,恢复放疗、化疗病人白血球外,可能对肝癌细胞还有直接抑制生长分化的作用。     

促凋亡蛋白Caspase-3与白血病细胞耐药的相关性

目的观察阿霉素(ADR)耐药的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/AO2在ADR和雄黄作用下细胞活力、凋亡及加入Caspase-3抑制剂前后Caspase-3酶活性的变化,探讨促凋亡蛋白Caspase-3与白血病细胞耐药的关系。方法①四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定药物作用下细胞株的细胞活力(A值);②DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况;③酶显色活性分析法(CAA)测定Caspase-3活性水平的变化。结果①MTT法:K562/AO2细胞的A值与雄黄呈时间、剂量依赖关系。②雄黄作用组有凋亡发生。③未加抑制剂组Caspase-3活性明显升高(P<0.05),对雄黄呈时间、剂量依赖关系,加入抑制剂后此关系消失,对ADR无此关系。结论Caspase-3酶活性水平的变化能显著影响药物诱导肿瘤细胞凋亡的能力,在肿瘤耐药的发生发展中起着重要的作用。     

胃癌细胞株SGC-7901及MGC-803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定

目的　探讨胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 3中survivin基因转录与表达情况 ,为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法　①利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度。结果　从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出 6 12bp的DNA片段 ,与预期的扩增片段大小相符 ;序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致 ;免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物。结论　中国人胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 3中均存在survivin基因的mRNA转录及蛋白的高表达