乌司他丁通过抑制肠黏膜细胞凋亡减轻大鼠肠道缺血-再灌注损伤

目的 探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁(ulinastatin,UTI)对大鼠肠缺血-再灌注损伤后肠黏膜屏障功能的保护作用及其机制.方法 24只成年雄性SD大鼠夹闭肠系膜上动脉1 h,再灌注1 h,随机分为空白对照组、对照组和治疗组.治疗组于缺血后经阴茎背静脉缓慢泵入UTI(5万单位/kg);对照组给予等量等渗盐水;空白对照组仅做开关腹并给予等量生理盐水作为对照.各组大鼠均于制模后采集标本,动态浊度法检测血清内毒素含量,TUNEL法检测肠黏膜上皮细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 空白对照组血清内毒素水平和肠黏膜细胞凋亡指数均低于对照组(P<0.01);治疗组BaxmRNA表达低于对照组(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达高于对照组(P<0.01).结论 乌司他丁可能通过抑制肠黏膜上皮细胞的凋亡,维持肠黏膜屏障的完整性,从而防止缺血-再灌注损伤时细菌和内毒素的移居.     

骨髓间充质干细胞对5/6肾切除大鼠肾脏损伤时Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对5/6肾切除大鼠肾损伤的保护作用,观察BMSCs对肾组织Bcl-2、Bax表达的影响。方法将雄性SD大鼠BMSCs用PKH26标记后注入受体雌性SD大鼠体内。40只受体雌性SD大鼠随机分为4组(n=10):假手术组、5/6肾切除+DMEM-F12组(模型组)、5/6肾切除+贝那普利组(对照组)、5/6肾切除+BMSCs组(干细胞组)。60d后观察肾功能改变;免疫组化法检测Bcl-2和Bax的表达,并观察PKH26标记的BMSCs在受体大鼠肾脏的分布情况。结果假手术组肾功能明显好于其余各组(P<0.05),对照组和干细胞组肾功能明显好于模型组(P<0.05);模型组Bcl-2、Bax表达及Bcl-2/Bax比值明显高于其余各组(P<0.05),干细胞组Bcl-2和Bax表达明显高于对照组(P<0.05)。5/6肾切除后第60d可见标记的BMSCs定位于肾组织中。结论外源性BMSCs可减少Bcl-2和Bax蛋白表达,下调Bcl-2/Bax比值,减少肾组织细胞凋亡,从而有利于肾功能的早期恢复。     

白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠肝脏的保护作用

目的 探讨白藜芦醇对实验性重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)大鼠肝功能的保护作用.方法 96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术(sham operation, SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)组、地塞米松(dexamethasone, DEX)治疗组和白藜芦醇(resveratrol, RES)治疗组.各组大鼠均于制模后3、6、12h采集标本.生化方法进行肝功能测定;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定血清TNF-α和IL-6含量;透射电镜观察胰腺和肝脏超微结构的变化;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2和caspase-3 mRNA表达;Western Blot检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2、caspase-3和线粒体内细胞色素C蛋白的表达.结果 SAP组各时间点血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和总胆红素(total bilirubin, TBIL)水平均明显高于SO组(P＜0.05),RES组和DEX组肝功损害较SAP组明显降低(P＜0.05).RES组和DEX组TNF-α、IL-6含量均明显低于SAP组(P＜0.05).SAP组出现明显细胞肿胀、毛细血管淤血、血栓形成、线粒体肿胀和细胞凋亡等超微结构的变化,RES组和DEX组上述改变明显减轻.RES组Bax、caspase-3 mRNA表达显著低于SAP组(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达明显高于SAP组.Western blot 检测结果与RT-PCR结果一致.RES组各项指标与DEX组差异不显著(P＞0.05).结论 白藜芦醇可以降低SAP大鼠肝细胞凋亡的发生,从而起到减轻SAP介导的肝脏功能损伤的作用.     

甘氨脱氧胆酸盐诱导人正常肝细胞HL-7702凋亡及其机制的研究

目的 观察甘氨脱氧胆酸盐(glycodeoxycholate, GCDC)对人正常肝细胞株HL-7702凋亡的影响,并探讨其凋亡机制.方法 终浓度分别为100、150、200、250μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞24h,光学显微镜观察GCDC对HL-7702细胞形态的影响,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测HL-7702细胞的凋亡率 ,用荧光指示剂Fluo-3/AM测定HL-7702细胞内钙离子浓度,RT-PCR测定Bcl-2、Bax基因mRNA表达水平.结果 终浓度为150μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞24h后,细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变;100、150、200、250μmol/L的GCDC均可诱导HL-7702细胞凋亡,呈剂量依赖性,凋亡率分别为(13.16±2.9)% (t=6.41)、(20.3±3.0)% (t=10.22)、(25.02±2.1)% (t=18.11)、(45.02±3.5)% (t=28.89),较对照组(2.2±0.6)%显著升高(P＜0.05);GCDC能使HL-7702细胞内钙离子浓度增加,且具有浓度依赖性;GCDC使细胞内Bcl-2 mRNA的表达下降、Bax mRNA的表达增加.结论 GCDC可能是通过增加HL-7702细胞内钙离子浓度,并进一步下调Bcl-2、上调Bax表达水平,从而诱导细胞凋亡.     

T-2毒素对胎儿软骨细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响及硒的保护作用

目的　探讨T 2毒素对软骨细胞凋亡的作用,和对凋亡调控蛋白Bcl 2 与Bax表达的影响,以及微量元素硒对软骨细胞的保护作用。方法　采用电镜,Annexin V/PI法检测T 2 毒素致人软骨细胞凋亡的情况,采用流式细胞仪检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax的表达。结果　T 2 毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变;不同浓度(1~20μg/L)的T 2毒素均可以引起软骨细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加,且在一定范围内呈浓度依赖性,T 2毒素浓度为20μg/L时早期凋亡率最高达5.60%,晚期凋亡率最高达8.61%。生理浓度的微量元素硒可部分减弱T 2毒素引起的凋亡;不同浓度(1~20μg/L)的T 2毒素都能引起Bcl 2和Bax表达水平提高,浓度为10~20μg/L时,Bax/Bcl 2比值升高;硒能部分对抗T 2 毒素引起的Bcl 2 和Bax 表达的提高,使Bax/Bcl 2 比值下降,以降低凋亡率。结论　T 2毒素在浓度为1 ~ 20μg/L 时,可以引起软骨细胞凋亡; T 2 毒素引起的软骨细胞凋亡与软骨细胞内Bax/Bcl 2比值升高有关,硒对T 2毒素引起的软骨细胞凋亡有一定保护作用。     

Effects of Panax notoginseng saponins on hydrogen peroxide-induced apoptosis in cultured rabbit bone marrow stromal cells

Objective To investigate the effects of Panax notoginseng saponins (PNS) on hydrogen peroxide (H2O2)-induced apoptosis in cultured rabbit bone marrow stromal cells (BMSCs). Methods BMSCs from 3-month-old New Zealand rabbits were isolated and cultured by the density gradient centrifugation combined with adherent method. The cultured BMSCs were divided into three groups: normal control, H2O2 treatment (100μmol/L), and PNS pretreatment (0.1g/L). Intracellular reactive oxygen species (ROS) levels as the index of oxidative stress were measured by using 2'7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate. Flow cytometry was used to observe the apoptosis of BMSCs by staining with annexinV-FITC/PI. The protein expression of Bax in BMSCs was analyzed by Western blotting. Activity of caspase-3 enzyme was measured by spectrofluorometry. Results Pretreatment with PNS significantly decreased intracellular ROS level induced by H2O2 (P<0.01). PNS markedly attenuated H2O2-induced apoptosis rate from 38.68% to 19.24%(P<0.01). PNS reversed H2O2-induced augmentation of Bax expression. Furthermore, PNS markedly reduced the altered in activity of caspase-3 enzyme induced by H2O2(P<0.01). Conclusion PNS has a protective effect on hydrogen peroxide-induced apoptosis in cultured rabbit BMSCs by scavenging ROS and decreasing Bax expression and caspase-3 activity.     

海洛因暴露对子代小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 观察子宫内海洛因暴露对小鼠海马caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响,探讨线粒体凋亡通路在海洛因暴露引起子代小鼠神经、行为发育异常中的作用.方法 于小鼠胚龄(embryonic day)E9～E18d时,每天给孕鼠皮下注射海洛因10mg/kg,建立子宫内海洛因暴露的小鼠模型.按出生前处理将仔鼠分为空白组(Con)、盐水组(Sal)和海洛因组(Her).待仔鼠14d时取海马,应用RT-PCR和Western Blot检测caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况.结果 与Con和Sal组相比,Her组仔鼠的caspase-3和Bax的蛋白表达明显增加(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论 海洛因暴露可引起子代小鼠海马caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达下调,提示线粒体凋亡通路可能参与了海洛因损伤小鼠神经行为发育的分子机制.     

EXPRESSION OF BAX AND BCL-2 IN MOUSE OFFSPRING BRAIN AFTER MATERNAL ORAL ADMINISTRATION OF MONOSODIUM GLUTAMATE

Ｇｌｕｔａｍａｔｅｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｐｌａｙｓａｋｅｙｒｏｌｅｉｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｌｌｄｅａｔｈｏｃｃｕｒｒｉｎｇｉｎｍａｎｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ.Ｂａｘ ,ａｐｒｏ ａｐｏｐｔｏｔｉｃｇｅｎｅｏｆｔｈｅＢｃｌ 2ｆａｍｉｌｙ ,ｈａｓｂｅｅｎｓｈｏｗｎｔｏｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｎｅｕｒｏｎａｌｄｅａｔｈ .Ｎｅｕｒｏｎａｌｄｅａｔｈｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｄａｍａｇｅｈａｓｂｅｅｎｔｈｏｕｇｈｔｔｏｒｅｆｌｅｃｔｎ…     

C57/BL6小鼠海马发育和老化过程中Bcl-2及Bax的表达

目的 观察C57/BL6小鼠海马发育老化过程中Bcl-2、Bax蛋白的表达变化.方法 取不同胚龄(embryonic day,E)、生后(postnatal day,P)日龄或月龄的小鼠海马,应用免疫组化及图像分析技术检测Bcl 2和Bax蛋白的表达.结果 E16 d～P7 d,海马CA区锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层B...     

EPO对早期糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的观察亚临床剂量EPO对糖尿病大鼠早期肾损伤的影响,并探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)及糖尿病EPO干预的两个剂量亚组(DMTA和DMTB)。采用链脲佐菌素诱导1型糖尿病大鼠模型,腹腔注射EPO10周后,测定血糖、血压、血红蛋白、肾功能;光镜及电镜下观察肾组织形态学变化;免疫组化分析肾组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax及细胞因子VEGF的表达。结果实验剂量EPO干预后,大鼠肾功能及其形态学指标得到显著改善;Bcl-2/Bax比值及VEGF表达升高;均呈剂量依赖性。血糖、血压、血红蛋白值与对照组相比无明显变化。结论亚临床剂量EPO可延缓早期糖尿病肾病发展进程,可能与上调Bcl-2/Bax蛋白表达比值,抑制肾脏细胞凋亡有关;在本实验条件下,肾组织VEGF的表达上调未对糖尿病肾病造成不良影响。