人B7.2 cDNA的克隆及其真核表达

为克隆人 B7.2 c DNA,构建 B7.2真核表达质粒 ,并在哺乳动物细胞中表达。分离正常人淋巴结淋巴细胞 ,经 LPS诱导后 ,以 RT- PCR,克隆 B7.2 c DNA;构建真核表达质粒 p BCMGSNeo- B7.2 ,转染哺乳细胞 ,进行表达。结果成功克隆了 B7.2c DNA,并经测序证实 :所构建的 B7.2抗原真核表达质粒可在哺乳动物细胞中高效表达。表明经 LPS诱导的人淋巴细胞可表达 B7.2 m RNA,所建立的 p BCMGSNeo-B7.2哺乳动物真核表达质粒 ,可供进一步研究 B7.2结构和功能。     

HBeAg特异免疫复合物检测及临床意义

采用单克隆抗－ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ法检测１１８例ＨＢＶ感染者血清中ＨＢｅＡｇ特异免疫复合物（ＨＢｅＡｇ／ＩＣ），结果表明∶ＨＢｅＡｇ／ＩＣ与ＨＢＶ复制相关，可作为ＨＢＶ复制的一种血清学标志，ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性者中，６２．２％患者ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性，提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ的形成致使夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ，这类患者仍可以是ＨＢＶ野毒株感染，并非均为ＨＢｅＡｇ缺陷变异株感染；ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清ＡＬＴ异常率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清（Ｐ＜０．０１），提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ存在与肝损伤有关。     

亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学分析

目的 对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor 1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究.方法 将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a( )中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用蛋白印迹法(Western blotting)进行免疫学分析.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果 均表明重组质粒pET-28a( )-EF-1构建成功.重组蛋白可被感染了亚洲牛带绦虫患者血清和猪血清识别,表明其具有免疫反应性.结论 亚洲牛带绦虫成虫EF-1基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.     

人颈椎间盘退变基因表达谱的研究

目的探讨人的颈椎间盘组织基因表达谱的变化,分析椎间盘退变的发生机制。方法改进的一步法抽取6例退变和6例正常颈椎间盘髓核的总RNA,用Cy3、Cy5荧光标记制成cDNA探针,再与22 575个cDNA基因表达芯片杂交,激光扫描荧光信号,对差异基因表达谱进行分析。结果进行6次扫描,退变和正常椎间盘髓核组织共有570个基因发生了差异表达,其中上调550个,下调20个。结论多种基因表达异常与颈椎间盘退变相关。     

THE CONSTRUCTION OF LEUKARYOTIC EXPRESSION PLASMID PCDNA3/HPV16E6 AND EXPERIMENTAL OBSERVATION OF NAKED DNA INJECTED INTO ANIMAL

Cervicalcancerisacommonmalignancyofmarriedwomen.HighriskHPV(HPV16,18)infectioniscloselyassociatedwithcervicalcancer(l).HPV16DNAcanbedetectedinapproximately50%~90?rvicalcarcinomastZ).HPV16E6andE7geneshasbeenprovedtobetransforminggenes.TheirgeneproductscanbindtoandinactivateP53andPRbrespectively,playingacausalroleinthedevelopmentofcervicalcarcinomat27.AlotofinvestigationindicatethatHPV16E6/E7wereconsistentlyandhighlyexpressedincervicalcarcinomas,andthatE6/E7proteinscouldinducebothhu…     

PCR法区别HBVRC－和CCC－DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的基因组为一松弛环状、部分双链的ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５＇与３＇端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ。     

5-氮胞苷对宫颈癌细胞系DAPK1异常甲基化的影响

目的　观察宫颈癌细胞系SiHa及HeLa中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1)的表达与甲基化修饰之间的相关性,以及5 氮胞苷对细胞DAPK1表达和生长的影响。方法　应用甲基化特异性PCR法分析细胞中DAPK1的甲基化状态;采用RT- PCR及免疫组化SABC法检测不同浓度 5- 氮胞苷干预对宫颈癌细胞 DAPK1 mRNA及蛋白表达的影响;MTT法观察5 -氮胞苷对细胞增殖的影响。结果　DAPK1基因在宫颈癌细胞 SiHa中有甲基化修饰,5- 氮胞苷干预能使其甲基化的DAPK1基因重新表达并抑制细胞生长。结论　DAPK1 的甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,5 -氮胞苷能使甲基化的DAPK1去除甲基化修饰,重新表达并恢复抑癌作用。     

从西安地区正常儿童尿中检测人巨细胞病毒DNA

为了研究人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的流行病学及鉴定ＨＣＭＶ核酸在尿中分布，我们用ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＨｉｎｄⅢ－ＥＤＮＡ片段制备探针，采用核酸杂交技术对取自西安地区１８０例３岁～５岁正常儿童的尿标本进行了ＨＣＭＶ相关序列的检测。结果显示出西安地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者３例（５０份尿标本）占６％；咸阳地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者７例（５０份尿标本）占１４％；兴平地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者１９例（８０份尿标本）占２５％。在不同的地区之间，阳性检出率有较明显地差异。     

人卵巢癌多药耐药细胞系COC_1/DDP的耐药机制探讨

用体外药物连续选择法建立了一株人卵巢癌多药耐药细胞系。发现耐药细胞内谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱甘肽转硫酶活性均增加，从而使细胞内药物失活增加；细胞内药物作用靶减少，拓扑异构酶活性降低；细胞内药物积聚量减少，但未见P-糖蛋白过度表达。提示卵巢癌耐药性的产生与药物失活增加、药物作用靶减少及细胞内药物积聚量减少有关。     

紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。