芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

大型船舶钨极氩弧重熔工艺应用

疲劳破坏是船体结构的主要破坏形式之一。改进结构节点的设计和施工工艺,可保证船体结构中受交变载荷作用的构件有足够的疲劳寿命。钨极氩弧(Tungsten Inert Gas, TIG)重熔是改善结构节点焊后疲劳强度的有效方法。与目前船上常用的几种改善疲劳强度的方法进行分析对比,对TIG重熔工艺的重要性进行充分论证,获得实施TIG重熔工艺的技术标准和操作要点。TIG重熔工艺不仅改善结构节点疲劳强度,而且为建造具有较长疲劳寿命的大型船舶找到一个行之有效的方法,可产生良好的经济和社会效益。     

弯弧平叉模具的设计

用弯弧平叉模具冲压后的平叉产品，很难完全达到平叉产品图的设计要求，往往要多次修模和修改图纸，本文阐述了该平叉一次性成功的模具设计新方法。     

ADI斜楔的两种等温淬火加热工艺的比较

铁路车辆用贝氏体球墨铸铁(ADI)斜楔的关键工序是产品等温淬火的加热工序,斜楔综合质量指标在铸态基本达到要求的情况下,取决于等温淬火的工艺及装备.     

高频感应加热曲面成形控制系统

高频感应加热曲面成形是船体建造中一项经验性很强的外板成形工艺,实船板加工的工艺流程和控制系统是高频感应加热曲面成形设备研究和开发的重要环节。介绍了高频感应加热曲面成形的国内外现状,分析了层次化、模块化软件系统的策略。     

多功能水净化器的研制

随着人民生活水平的不断提高,居民对家庭用水的水质量要求也在不断的提高,但是由于多种原因,我国自来水网提供的水质还达不到直接饮用的水平,水中杂质多,另外由二次污染引起的细菌和微生物比较多,因而对人的健康损害很大,所以人们喝的水要经过再次的杀菌和过滤才能被饮用。另外,蔬菜瓜果上存在的农药残留物对人体健康的危害也缺乏方便有效的去除方法。为了解决以上难题,本研究组作了深入探讨,获得了较为理想的结果,且以此原理设计了适合进入家庭使用的多功能净水器。该仪器能同时满足人们的饮用水和洗涤用水的需要,其中用于洗涤的水可以用来杀灭被洗物上的细菌和病毒,还可以分解蔬菜瓜果上存在的农药残留,也可以呵护人的皮肤。     

红外辐射在汽车工业的精湛应用

英国汽车零部件供应商Domnick Hunter公司现在能够更加高效、经济、环保的生产空气和燃油滤清器产品，这一过程正是通地使用红外线烘干得以实现的。以往，在最后的组装工序中滤清器零部件使用的胶粘剂需要四个小时来风干，这成为滤清器生产中的瓶颈。现在这一工序只需30分钟即可完成。这种进步是通过使用贺利氏特种光源——著名的从事贵金属材料和技术的企业贺利氏控股集团分支机构之一——的辐射器系统得以实现的。