芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

"中国机械"--意大利与中国工业合作

2006年3月15日下午3：00，意大利雷吉奥艾米利亚企业家协会自动化机械俱乐部和艾米利亚罗马涅工业家协会在上海新天地举办了新闻发布会，旨在向中国主流媒体和专业媒体推荐“中国机械”计划和参与计划的企业，以增进相互了解、传播信息和进行推广。     

21世纪集装箱机械的技术进步

<正> 上世纪60年代出现的集装箱是运输业的一次伟大革命,也是一次创造性的技术进步,它数十倍的提高了劳动生产率,带来巨大的财富,改变了港口、运输船、装卸机械的面貌。如今,集装箱运输已成为所有国家发展外贸不可或缺的手段。在进入21世纪之始,展望未来,集装箱机械将会有哪些技术进步呢?不必讳言,由于船舶大型化的发展,集装箱起重机变得愈来愈大,外伸70米,起重量70吨,起升高度42米甚至47米的起重机正在设计中即将诞生,还有吊两只40’箱的吊具等等。本文仅就ZPMC研发并获得初步成果的几项技术进步谈五个问题。     

给自卸汽车车槽内自动喷油的装置

在公路工程施工中 ,需要用自卸车把沥青混凝土拌和站生产的沥青混凝土运输至摊铺现场。在自卸车装沥青混凝土前 ,需用柴油和水的混合液或肥皂水把图 1　原理图自卸车的车槽内壁润滑一遍 ,以便在自卸车向摊铺机内卸料时沥青混凝土不至于粘在车槽内壁上。以往需用民工爬上爬下用拖把醮柴油和水的混合液把车槽内壁擦一遍 ,劳动强度很大。为了解决这个问题 ,我们设计制作了一种装置 ,其原理见图 1。它的两个喷油嘴安装在沥青混凝土拌和站主机楼一层下面如图 2所示 ,两个喷油嘴之间的图 2　安装位置距离可以根据车槽的宽度进行调整。该装置的使用…     

整治钢轨接头病害的有效机具—钢轨低接头平轨机

本文叙述了钢轨低接头平轨机的研制和应用。介绍了该机的主要技术参数，工作原理和结构特点，以及使用效果。结果表明，该机对整治钢轨接头病害，提高线路质量的效果是显著的。     

铁路冷藏运输发展趋向

介绍了俄罗斯以及美国，西欧国家，德国和中国发展冷藏运输的特点。指出除了改进机械制冷的冷藏车以外，使用其他冷源的冷藏车也正在得到广泛的应用。     

PLC在机械保温车用制冷机组上的应用

介绍了用可编程控制器(PLC)实现机械保温车用制冷机组自动控制的原理，以及利用PLC的网络功能实现了车组的连挂控制。